评估酸激活的分子伴侣在酸胁迫下对 E. coli 的保护作用

取对环境胁迫敏感的重组E. coli菌株培养物。

实验培养物携带一种编码酸激活分子伴侣的质粒，而对照培养物仅携带质粒骨架。

将单菌落接种至含抗生素的培养基中，以确保质粒保留，并进行培养以促进细菌生长。

将培养物稀释到含有抗生素和诱导剂的新鲜培养基中，以激活分子伴侣的表达。

将培养物培养至对数生长期中期，然后稀释至特定的光密度。

加入酸以降低 pH 值，诱导酸胁迫。

在实验培养中，酸性条件会激活分子伴侣，从而稳定细胞内的蛋白质并防止其聚集。在对照培养中，由于缺乏该分子伴侣，细胞内的蛋白质会发生变性并聚集。

加入碱以中和 pH 值，终止酸胁迫。

通过随时间测量光密度来监测细菌生长。

试验培养物中增强的生长表明分子伴侣在酸胁迫期间具有保护作用。

在含有氨苄青霉素的50毫升LB培养基中制备过夜培养物，并在200 RPM、30摄氏度条件下培养细胞。将过夜培养物用含氨苄青霉素的25毫升LB培养基稀释40倍。

在30摄氏度、200 RPM条件下，在含有0.5%阿拉伯糖的培养基中培养细菌，使其在600纳米处的光密度（OD₆₀₀）达到1.0，以诱导HDEB蛋白表达。对于pH shift实验，使用含有氨苄青霉素和阿拉伯糖的LB培养基将细胞稀释至OD₆₀₀为0.5。通过加入适当体积的5摩尔盐酸调节至相应的pH值。

在指定时间点后，通过加入适量的五摩尔氢氧化钠中和培养物。在30摄氏度下，通过OD测定对中和后的培养物及液体培养物的生长情况进行12小时的监测。