基于热裂解的致病菌基因组DNA提取

从在营养丰富的琼脂培养基上培养的致病性细菌菌落开始。

选择单个菌落，以确保细菌细胞具有遗传同质性，并减少基因分型过程中的变异。

使用无菌接种环，将选定的菌落转移至超纯水中，以尽量降低将污染物引入样品的风险。

涡旋振荡悬浮液以打散菌落，并使细菌细胞均匀分散。

接下来，加热悬浮液以破坏细菌细胞包膜，该包膜由外膜、肽聚糖层和内膜组成。

这会导致细菌细胞裂解，并将包括基因组DNA在内的细胞内含物释放到水中。

高速离心悬浮液，以分离细胞碎片和基因组 DNA。

将上清液转移至新离心管中，用于后续的基因分型应用。

首先，使用无菌接种环将 Yersinia ruckeri 纯培养物接种于适合的琼脂平板上。在 22 摄氏度下培养一至两天，或在 15 摄氏度下培养三至四天。随后，用接种环从每个培养皿中挑取一个典型的单菌落，转移至含有 50 微升超纯水的 1.5 毫升离心管中，以重悬菌体。

涡旋混匀片刻，在100摄氏度的加热块中孵育7分钟。然后在16,000 g 条件下离心3分钟，用移液器小心地将上清液中的模板DNA转移至空的1.5毫升离心管中。立即进行下一步操作，或将DNA在-20摄氏度保存。