暴露合成口腔细菌群落于模拟消化阶段

从一支含有常见于人类口腔的合成细菌群落的试管开始。

加入含有黏蛋白（一种糖蛋白）和酶α-淀粉酶的模拟唾液流体，以模拟口腔环境，然后在振荡条件下孵育。

细菌与黏蛋白相互作用，从而促进聚集，而α-淀粉酶则模拟了唾液的酶学环境。

采集样本。

接着，加入含黏蛋白的模拟胃液，调节 pH 至酸性以模拟胃内环境，并在振荡条件下孵育。

酸性条件会杀死对酸敏感的细菌种类，但耐酸以及被黏蛋白包被的轻度耐酸细菌种类能够存活。

采集另一个样本。

最后，加入含有碳酸氢盐和生理盐溶液的模拟肠液。振荡孵育。

高盐环境会引发离子胁迫，从而破坏细菌膜并降低其存活率。

收集最终样品。

所有三个模拟后样品现在均已准备好进行细菌活力评估。

为了模拟口腔消化，将3毫升细菌群落转移至50毫升无菌管中，并与3毫升模拟唾液液（SSF）混合。

加入75单位/毫升的人类唾液α-淀粉酶（type 9A）和2克/升的猪胃黏蛋白（type 2）。将混合物在37摄氏度、100转/分钟的条件下孵育2分钟。采集2毫升样品用于DNA提取和流式细胞术定量分析。

为模拟胃消化过程，向3毫升细菌液中加入4毫升模拟胃液（SGF）。如有必要，使用1摩尔盐酸调节pH至3。将样品在37摄氏度、100转/分钟条件下孵育2分钟。

然后收集2毫升样品。对于小肠消化，向细菌中加入4毫升模拟肠液（SIF）。如有必要，使用氢氧化钠调节pH值。

然后将样品在 37 摄氏度、100 转/分钟的条件下孵育 2 分钟，并收集 2 毫升样品。