0 次观看 • 5:43 分钟 • November 28th, 2025
取一片感染了病原菌Candidatus liberibacter的叶片。
将其切成小块，用液氮速冻后研磨，以破碎植物细胞并释放其内容物，包括其中的细菌。
加入细胞核裂解缓冲液并充分混匀。
在高温下孵育以裂解膜结构，从而从植物细胞核和细菌细胞中释放基因组DNA。
加入RNase酶，倒置离心管混匀，并孵育以降解RNA。
加入蛋白沉淀溶液并混匀以促进蛋白质聚集。离心以沉淀蛋白质和细胞碎片。
将上清液转移至含有异丙醇的离心管中，混匀，使DNA沉淀为可见的丝状物。离心以收集DNA沉淀。
用乙醇洗涤沉淀以去除杂质，空气干燥，然后使DNA重新水合。
在高温下孵育以溶解 DNA，然后将样品加入微量比色皿中。
使用分光光度计测定分离的 DNA 浓度。
首先，使用干净的剪刀从柑橘树上剪下一整片新鲜叶片，并放入干净的塑料三明治袋中。然后，加入少量液氮以冷却研钵和研杵。接着，用剪刀将叶片组织剪成小块，每块大小约为一平方英寸。
将叶片碎片放入研钵中，立即冷冻。迅速开始用研钵研磨叶片组织，直至液氮挥发，留下细的绿色粉末。接着，将金属刮勺在液氮中冷却10至15秒。然后用冷却的刮勺将研磨好的组织从研钵中转移至1.5毫升微量离心管中。
使用1000微升移液器向样品中加入600微升细胞核裂解液。然后将样品涡旋震荡1至3秒。将离心管置于65摄氏度的水浴中孵育15分钟。
孵育期结束后，使用10微升移液器向裂解液中加入3微升RNase溶液以去除RNA。然后，通过倒置离心管2至5次，混匀管内溶液。
在培养箱中37摄氏度孵育15分钟。15分钟后，向样品中加入200 µL蛋白质沉淀溶液。高速涡旋振荡离心管20秒。接着，以13000 ×g离心样品3分钟。
离心过程中，向一个新的1.5毫升微量离心管中加入600微升室温保存的异丙醇。离心结束后，小心将离心管中的上清液转移至含有异丙醇的试管中。弃去沉淀物。
将离心管倒置，使DNA可见，呈线状条带。接着，在室温下以13000 g离心1分钟。
离心后，将上清液小心倒出。然后，向沉淀中加入600 µL的70%乙醇。反复倒置离心管数次，以洗涤沉淀。
将离心管在13000 g下离心1分钟。离心结束后，小心吸去上清液。然后将管盖打开，倒置在吸水纸上，室温晾干15分钟。
干燥后，向沉淀中加入100微升DNA重悬液。将DNA悬浮液置于65摄氏度水浴中孵育1小时，期间定期轻弹离心管以混匀。
在微量比色皿中加入1 µL纯水。将水作为空白对照在分光光度计上读取。然后，在微量比色皿中加入1 µL样品。将微量比色皿放入分光光度计中，测定DNA浓度。