0 次观看 • 3:17 分钟 • November 28th, 2025
从保持在温暖温度下的熔融软琼脂开始。
将测试菌株丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)接种到琼脂培养基中。
然后短暂涡旋以均匀分散细胞。
将混合物倒入已凝固的琼脂平板上,并均匀涂布。
盖上盖子,静置使其凝固。
将过滤后的上清液点样于凝固的琼脂表面。
上清液含有来自应激诱导的供体菌株 P. syringae 的细菌素,即一种抗菌分子。
孵育平板,以促进细菌生长及细菌素在琼脂中的扩散。
细菌素会结合到测试菌株的特定表面受体上,并破坏其细胞膜,导致细胞死亡。
这会在琼脂上形成一个透明区域,表明测试菌株被抗菌分子细菌素杀死的范围。
将培养物按1比100的比例稀释至新鲜KB培养基中,在室温下振荡培养3至4小时。接着,通过高压灭菌将琼脂悬浮于超纯水中制备无菌水琼脂。
使用前将熔融的软琼脂置于60摄氏度水浴中保温。用无菌刻度移液管将三毫升软琼脂转移至无菌培养管中。将培养管放回水浴中以维持其熔融状态。
在倒入覆盖层之前,让熔化的琼脂冷却,但不要使其凝固。
接种前必须保持琼脂处于高温完全熔融状态。否则,覆盖层会出现颗粒状外观,且更难以观察和解释。
在无菌操作台中,取100微升测试菌株培养物接种至软琼脂中,涡旋混匀。手动轻轻旋转培养物10至15秒,然后将其倒入琼脂平板底部。倾斜平板并朝各个方向转动,确保软琼脂均匀覆盖底层琼脂表面。
盖上培养皿,静置 20 到 30 分钟使其凝固。凝固过程中请勿扰动培养皿。待其完全凝固后,将 2 至 5 微升上清液滴加到覆盖层上。
将平板在室温下孵育过夜。次日早晨观察并记录结果。采用此方法,两种P. syringae菌株受到不同细菌素的抑制。菌株A对一种高分子量细菌素——尾素(tailocin)敏感,但对另一种低分子量细菌素不敏感。
本研究探讨了源自丁香假单胞菌的细菌素的抗菌特性。实验方法包括用细菌培养物接种软琼脂,并评估细菌素对测试菌株的作用效果。
软琼脂覆盖法可快速检测细菌素介导的杀菌作用,为丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)的抗菌活性提供功能性读数。该方法有助于抗菌药物研发管线的早期靶点验证和机制层面的风险评估。其定量且可重复的实验结果有助于可靠地筛选出具有抑制活性的候选化合物,推进后续开发。
该检测方法适用于早期发现与先导物鉴定的衔接阶段,在进行临床前模型评估之前,提供针对抗菌活性的功能性筛选。
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最后更新:22 八月 2026