软琼脂覆盖法检测细菌素介导的杀伤作用 Pseudomonas syringae

0 次观看3:17 分钟 • November 28th, 2025

从保持在温暖温度下的熔融软琼脂开始。

将测试菌株丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)接种到琼脂培养基中。

然后短暂涡旋以均匀分散细胞。

将混合物倒入已凝固的琼脂平板上,并均匀涂布。

盖上盖子,静置使其凝固。

将过滤后的上清液点样于凝固的琼脂表面。

上清液含有来自应激诱导的供体菌株 P. syringae 的细菌素,即一种抗菌分子。

孵育平板,以促进细菌生长及细菌素在琼脂中的扩散。

细菌素会结合到测试菌株的特定表面受体上,并破坏其细胞膜,导致细胞死亡。

这会在琼脂上形成一个透明区域,表明测试菌株被抗菌分子细菌素杀死的范围。

将培养物按1比100的比例稀释至新鲜KB培养基中,在室温下振荡培养3至4小时。接着,通过高压灭菌将琼脂悬浮于超纯水中制备无菌水琼脂。

使用前将熔融的软琼脂置于60摄氏度水浴中保温。用无菌刻度移液管将三毫升软琼脂转移至无菌培养管中。将培养管放回水浴中以维持其熔融状态。

在倒入覆盖层之前,让熔化的琼脂冷却,但不要使其凝固。

接种前必须保持琼脂处于高温完全熔融状态。否则,覆盖层会出现颗粒状外观,且更难以观察和解释。

在无菌操作台中,取100微升测试菌株培养物接种至软琼脂中,涡旋混匀。手动轻轻旋转培养物10至15秒,然后将其倒入琼脂平板底部。倾斜平板并朝各个方向转动,确保软琼脂均匀覆盖底层琼脂表面。

盖上培养皿,静置 20 到 30 分钟使其凝固。凝固过程中请勿扰动培养皿。待其完全凝固后,将 2 至 5 微升上清液滴加到覆盖层上。

将平板在室温下孵育过夜。次日早晨观察并记录结果。采用此方法,两种P. syringae菌株受到不同细菌素的抑制。菌株A对一种高分子量细菌素——尾素(tailocin)敏感,但对另一种低分子量细菌素不敏感。

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最后更新:22 八月 2026