通过单菌落筛选分离耐受胁迫的细菌

取一株在胁迫条件下长期培养的细菌培养物。

长期压力会导致自发突变、自然选择以及耐受压力的细菌增殖。

为了分离这些细菌，取少量培养物接种于含有相同胁迫因子的琼脂平板上，并进行培养。

该胁迫因子确保仅有适应胁迫的细菌菌落能够生长。

挑选单个菌落以保持遗传纯度，并用含有胁迫剂的液体培养基进行接种。

振荡培养以促进耐受应激细菌的生长。

使用少量培养物接种含有胁迫因子的新鲜培养基。

同时，将野生型或非应激适应性细菌接种到另一含有胁迫因子的培养基中。

定期测量吸光度，作为细菌生长的指标。

比较生长曲线，以确保成功分离出耐受胁迫的细菌。

制备含有与培养基中相同胁迫剂及相同浓度的1.6%琼脂平板培养基。取0.1毫升来自恒化器的流出培养物，涂布于平板上，并在37摄氏度下培养16小时。培养结束后，使用无菌牙签挑取平板上的单菌落，接种至含有与恒化器中相同胁迫剂及相同培养基浓度的15毫升试管中。

孵育六小时。取一毫升培养液转移至含有50毫升培养基的250毫升锥形瓶中。每小时收集0.5毫升培养液，测定600纳米处的光密度。

在施加胁迫条件下，比较适应菌株与野生型菌株的生长速率