0 次观看 • 4:04 分钟 • November 28th, 2025
采集含有多种微生物(包括可降解环境污染物的细菌)的海水样品。
对样品进行连续稀释以降低微生物密度,并将其接种到营养培养基上。
孵育后,挑选形态上不同的菌落,这些菌落可能仍含有遗传和代谢上多样的细菌类型。
挑取每个选定的菌落进行划线,以分散单个细胞,并进行培养。
每个细胞形成一个菌落,代表一种具有独特代谢特征的遗传纯合细菌分离物。
将每种分离物接种到培养基中,并进行培养以增加生物量。
离心培养物,弃去上清液,并用缓冲液洗涤以去除残留的培养基。
将细胞重悬于缓冲液中,并接种至含有环境污染物雌二醇(EE2)的筛选培养基中。
作为培养基中唯一的碳源,EE2 筛选出能够将其代谢以获取能量和生长的细菌。
培养基中的浑浊现象表明细菌生长,证实已分离出能够降解污染物的细菌菌株。
选择细菌时,首先对珊瑚样品用无菌生理盐水进行梯度稀释至10⁻⁹,对水样进行梯度稀释至10⁻⁶。每次移液前需将移液器吸头上下吹打五次,然后弃去吸头。
然后,依次涡旋混匀每个样品。每次进行下一步连续稀释前,均需将样品涡旋混匀5秒。用移液器吸取100 µL每种稀释液,接种于含有3%氯化钠的LB琼脂培养基的培养皿中,并进行涂布。
将平板在目标温度下(例如 26 °C)孵育 1 至 3 天。每天观察一次平板。使用划线平板法,在新的平板上挑选并分离具有明显不同生长形态的菌落。
根据需要重复此步骤,直至平板上长出纯菌落。按照文中的描述,将分离菌株储存在4摄氏度或甘油中。为进行雌二醇(EE2)降解能力测试,从新鲜平板上挑取单菌落,接种于含有2毫升无菌LB培养基的试管中。
如果是甘油菌种保存液,取10微升甘油菌液,划线接种于LB琼脂平板上。在24至28摄氏度下培养过夜,以获得单菌落。将装有LB培养基的试管置于倾斜位置,在24至28摄氏度下以150 ×g 持续振荡培养过夜。
细菌培养后,在室温下以8,000 × g离心八分钟收集菌体。弃去上清液。为洗涤残留的LB肉汤,加入两毫升生理盐水重悬菌体。
重复洗涤两次,以确保无碳源残留。将洗涤后重悬的细胞接种于仅以雌二醇(EE2)为唯一碳源的最低量Bushnell Haas培养基中。通过在600纳米处测定光密度,并在培养16至72小时后于LB琼脂培养基上测定菌落形成单位,评估细菌生长情况。
本研究概述了一种分离和表征能够降解环境污染物(特别是乙炔雌二醇,EE2)的细菌的方法。通过使用连续稀释法和选择性培养基,研究人员可以鉴定并培养出具有污染物降解能力的细菌分离株。
分离能够降解污染物的海洋细菌,可通过鉴定具有特定代谢能力的菌株,实现生物修复应用中的早期靶点验证。该方法通过在放大规模前确认功能性的降解途径,支持环境生物技术中的机制性风险降低。该技术为后续微生物修复方案开发中的菌株筛选提供了可预测的信心。
该方法适用于从初始环境采样到生物修复候选物的先导识别及临床前评价的整个发现流程。
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最后更新:22 八月 2026