海水样品中石油降解海洋细菌的选择性富集与分离

从含有多种微生物群落（包括能够降解烃类的细菌）的海水样品开始。

用生理盐水对样本进行连续稀释，以降低微生物密度。

将原油加入无菌蒸馏水中，并搅拌混合物，以部分溶解原油中的烃类成分。

静置混合物，使其分离为水溶性和水不溶性油相组分。

使用每种油组分作为唯一碳源制备选择性琼脂平板，以富集能够降解可溶性或疏水性碳氢化合物的细菌。

将稀释的海水样品接种至选择性培养基上，并在环境温度下培养。

形成的菌落依赖羟化酶和双加氧酶等酶来代谢烃类化合物。

挑选形态特征明显的菌落，并将其重新划线接种到含有相同油组分的新鲜培养基上，以获得纯培养的烃类降解细菌。

该方法能够选择性地分离出海洋中降解石油的细菌。

为了制备以原油的油-水可溶组分和油-水不溶组分作为唯一碳源的最低限度培养基，将1-2%的原油加入含有底部阀门的滤瓶中的500毫升无菌蒸馏水中。将滤瓶置于24至28摄氏度条件下，以150×g持续振荡48小时。之后，将滤瓶放置于稳定表面上，静置10至20分钟，使可溶组分与不溶组分分离。

然后打开底部的滤瓶，将油水可溶性组分转移至新的无菌瓶中，保留油水不溶性组分。接着准备两瓶布什内尔-哈斯琼脂最低培养基，进行高压灭菌。

以油水可溶组分作为唯一碳源，配制500毫升琼脂培养基。同样地，以油水不溶组分进行操作，并将每种培养基各约25毫升转移至各自的培养皿中。为分离降解石油的细菌，重复使用先前稀释的样品，用移液器将每种稀释液100微升接种到含有琼脂培养基的培养皿中，并进行平板培养。

请务必为您的培养皿保留阴性对照。在目标温度下将培养皿孵育1至3天，并重复之前的分离步骤。