在微流控系统中以单细胞分辨率追踪细菌生长

从倒置荧光显微镜载物台上安装的微流控装置开始。

该装置由一个聚合物芯片构成，芯片上具有水平的进样通道。每个通道内排列着一系列一端封闭的狭窄沟槽，用于将细菌细胞限制成线性链状结构。

沟槽内含有表达荧光蛋白的非运动性细菌细胞，从而使其可视化成为可能。

每个进样通道均连接至注射泵，以可控流速输送富含营养的培养基。

启动流动，使培养基扩散到沟槽中，以支持细菌生长。

受限的细菌细胞在沟道内分裂，形成一串子代细胞。

沟道设计确保开放端的新生细胞被冲走，从而实现对最古老细胞的长期追踪。

随时间拍摄沟槽的图像，以追踪单个细菌细胞的生长和分裂。

将加载好的装置小心地安装到载物台插件上，方法是用胶带将PDMS两侧的盖玻片固定在载物台插件底部。翻转载物台插件装置组件，使PDMS面朝上，并将其放置在柔软的表面（如无尘擦拭纸上）。

将第一相注射泵的流速调节至 35 微升每分钟。然后依次操作每一通道，先插入入口针头，再插入通向废液烧杯的出口针头。目视检查装置是否泄漏后，观察出口管路中是否有过量细胞出现；过量细胞会在培养基弯月面中呈现为浑浊条带，并缓慢向废液烧杯移动。

当设备运行约15分钟后，将第一相注射泵设置为1.5微升/分钟，并暂停流体流动。将整个泵和装置移至倒置荧光显微镜下，然后以1.5微升/分钟重新启动第一相培养基的流动。小心地将带有装置的载物台插入件安装到显微镜上，必要时使用胶带引导进样和出样管路。

在设备上找到合适的成像位置，并按需开始成像。需要注意的是，细胞通常需要数小时才能达到稳态和对数生长期，因此可根据需要延迟图像采集的开始时间，以便在平衡期结束后再开始成像。