将可诱导基因表达系统转染至表达细菌效应蛋白的细胞中

取表达CaeB（一种抗凋亡细菌蛋白）的人类测试细胞。

使用缺乏 CaeB 的细胞作为对照。

引入与四环素诱导型基因表达系统结合的转染试剂复合物，该系统包含调节子质粒和应答质粒。

调控质粒编码一种转录激活剂和阻遏蛋白，而应答质粒则编码由TRE控制的促凋亡蛋白。

孵育细胞以促进质粒摄取和调控蛋白的表达。

无四环素时，激活子保持非活性状态，而抑制子则抑制由TRE驱动的转录。

加入四环素类似物并孵育。

该类似物可促进激活因子与TRE的结合，从而启动促凋亡蛋白的表达。

在对照细胞中，这会触发凋亡信号通路，激活凋亡标志物。

在表达 CaeB 的细胞中，CaeB 抑制凋亡信号通路，从而减少标志物的活化。

在表达 CaeB 的细胞中，凋亡标志物的活化程度降低，表明 CaeB 抑制细胞凋亡。

开始本实验时，将稳定表达GFP或GFP-CaeB的HEK293细胞以每孔100,000个细胞的密度接种于12孔板中。

接下来，分别在 75 µL Opti-MEM 培养基中制备 DNA 和聚乙烯亚胺转染试剂，并在室温下孵育 5 分钟。为形成复合物，将两种混合液一起在室温下孵育 15 分钟。随后，将聚乙烯亚胺-DNA 溶液逐滴加入细胞中，并在 37 °C、5% CO₂ 条件下孵育。

转染后5小时，通过向培养基中加入1微克/毫升的多西环素，诱导促凋亡蛋白的表达。然后，在37摄氏度、5%二氧化碳条件下孵育细胞18小时。