利用延时显微镜持续监测细菌中的生物噪声

从一个培养皿开始，其中细菌被包埋在琼脂糖凝胶垫下方，以固定细菌并支持单层生长。

该细菌组成型表达绿色荧光蛋白，从而实现对基因表达的实时监测。

在垫片周围倒入额外的琼脂糖凝胶以密封样品，并在室温下使其凝固。

用封板膜密封培养板，打孔以允许气体交换，并倒置培养板以防止冷凝。

将培养板置于低温下孵育，以稳定凝胶并防止细菌分裂。

接下来，将浸油涂抹在物镜上，并将培养板置于共聚焦显微镜载物台上。

开始延时成像。

随着GFP逐渐成熟，它开始发出荧光。在细胞分裂过程中，这些荧光蛋白被分配到子细胞中，导致荧光强度下降。

这会形成锯齿状的荧光模式，相同环境下基因完全相同的细胞之间这种模式的差异反映了基因表达中的生物学噪声。

为了成像样品，将烧瓶从水中取出，使凝胶溶液冷却至体温。将3毫米厚的凝胶倒入样品板的边缘。当琼脂糖完全凝固后，用胶带密封样品板，并使用25号针头在胶带上刺出多个小孔。

然后将培养皿倒置于 4 摄氏度环境中至少 30 分钟，使琼脂糖充分凝固，同时抑制细胞有丝分裂。在 24 小时内，使用荧光共聚焦显微镜以最低放大倍数定位样品，并启动显微镜的自动聚焦系统。在相应物镜上滴加镜油，并使用载物台控制器移动培养皿，小心铺展镜油。

然后重新启动自动对焦功能，并按照默认建议的Z步进截面设置对样品进行成像。