体外 批式培养模型模拟人肠道菌群的结肠发酵

从一个置于厌氧环境室内的试管开始，该试管内含有营养丰富的培养基和预先水合的可发酵纤维。

试管内部的缺氧条件模拟了人类结肠的厌氧环境。

接下来，向试管中加入含有肠道微生物的稀释均质粪便样本，并进行孵育。

定期倒置试管，使微生物与纤维充分混合。

孵育期间，微生物通过厌氧代谢和发酵纤维，产生短链脂肪酸及其他代谢产物，从而降低培养基的pH值。

定期从发酵混合物中取样，以监测代谢产物的生成并检测其 pH 值。

在低温下离心分装样品，以将微生物生物量分离成沉淀。

将含有代谢物和短链脂肪酸的上清液转移至新管中。

将微生物生物量和上清液均在液氮中冷冻。

最后，将样品储存于低温条件下以备进一步分析。

将接种后的试管置于厌氧培养箱内37摄氏度培养，每小时轻轻倒置一次，以重新悬浮纤维和接种物。在培养3、6、9或24小时后，取出适量发酵培养基，于4摄氏度下以14,000 × g离心10分钟。

立即将上清液和沉淀用液氮速冻，速冻后将上清液于-80摄氏度保存用于短链脂肪酸分析，沉淀于-80摄氏度保存用于微生物组分析。