使用自动化微生物反应器监测不同培养基配方中的细菌生长

0 次观看2:51 分钟 • November 28th, 2025

取一种经过基因改造的细菌培养物,该细菌被设计为携带一种质粒,该质粒可表达分泌型荧光蛋白并赋予抗生素抗性。

将其接种至含有抗生素的培养基中,并在振荡条件下培养以促进细菌生长。

抗生素可确保只有保留质粒的细胞才能增殖。

当培养物达到所需密度时,将其转移至自动化液体处理系统。

深孔板中含有不同浓度的基本营养物质,将其分配到微量滴定板中以制备不同的培养基配方。

将细菌培养物接种到平板的每个孔中。

密封培养板并将其放入微生物反应器中,以保持均匀的温度和通气。

不同的配方会导致细菌生长和荧光蛋白分泌的差异。

设备中的光学传感器可测量细胞密度和荧光,从而能够比较不同培养基配方下的细菌生长和荧光蛋白的产生情况。

在工作台上,用70%乙醇擦拭深孔板后,在层流罩中干燥,以对用于储存储备液的深孔板进行灭菌。通过将工作细胞库中的一个等分试样接种到含有25毫克/升卡那霉素的50毫升BHI培养基中,启动种子培养。将所有必要的实验器具放置在机器人工作台上,并将储备液倒入相应的实验器具中。

然后,启动用于培养基制备的机器人工作流程,确保最后一个步骤即接种步骤能够及时完成,以配合种子培养的开始。在接种后约两小时取样种子培养物,通过测量600纳米波长处的光密度(OD600)来监测菌体生长情况。此后每小时持续监测一次生长情况。

大约五小时后,菌液的 OD600 达到 3 至 4 之间,可用于接种主培养物。将种子培养物置于液体处理工作站的台面上,并继续进行培养基制备方案。接种后密封培养用微孔板。

接下来,将密封的培养MTP放入Biolector设备中,然后启动预设的培养程序。