成像人类肺组织中细菌定位及宿主相互作用

取带有荧光标记的Staphylococcus aureus悬液以及感染了相同荧光标记细菌的人肺泡肺组织。

将光纤共聚焦荧光显微镜探头的远端尖端插入细菌悬液中并进行扫描。

明亮的荧光信号证实了细菌膜的标记以及探针的成功激活

当探针在悬液中移动时，记录荧光信号。

使用浸有双氧水的镜片清洁布擦拭探针，以去除残留细菌并防止背景荧光

将清洁后的探头与组织直接接触，并扫描其表面。

在组织中，胶原蛋白和弹性蛋白纤维呈现为自发荧光基质，而荧光标记的细菌则表现为明显明亮的斑点。

缺乏荧光的肺泡腔表现为暗区。

录制视频以同时捕捉与组织附着的和松散相关的细菌，从而实现在宿主肺泡组织中对细菌感染的实时可视化观察。

开始数据采集时，点击屏幕上的“开始”按钮或踩下左脚踏板以开启激光。接着，对每一份细菌悬液样本进行成像。将FCFM成像光纤的远端插入悬液中，并缓慢移动光纤以扫描样本。

通过踩下右侧脚踏板或选择屏幕上的录制控件，在光纤缓慢移动经过样本时录制任意时长的视频。在不同样本之间，使用8%过氧化氢和镜头清洁纸清洁FCFM成像光纤的远端。为对每份肺组织样本进行成像，将FCFM成像光纤的远端插入样本中，并确保光纤末端与组织直接接触。

然后轻轻移动成像光纤的末端以检测样品。将光纤末端从组织上抬起会使组织离开焦平面。然而，此方法可用于成像未附着在组织上的标记细菌。

当光纤在样品周围缓慢移动时，通过按压右脚踏板或选择屏幕上的录制控件，即可录制任意时长的视频。