选择性清洗 秀丽隐杆线虫 用于富集肠道微生物群的线虫

取一个培养皿 秀丽隐杆线虫 携带目标细菌定植于肠腔内的幼虫。

培养皿中含有已知的细菌菌株作为食物。饥饿处理线虫，使其消耗所有细菌并进入休眠阶段。

加入培养基并将线虫转移至离心管中。

离心并弃去上清液。

加入去垢剂溶液，振荡以去除表面附着的细菌，再次离心，并弃去上清液。

重复洗涤步骤，然后将线虫转移至新的培养平板。

让蠕虫爬行，以去除表面和肠腔中松散附着的食物细菌，同时保留稳定定植于肠道中的目标细菌。

重复转移和爬行步骤，以确保彻底清除食物细菌。

加入培养基，将线虫转移至表面皿中，并进行解剖以暴露其肠道。

解剖含有目标细菌的肠道，将其收集到装有水的试管中，并冷冻以备后续使用。

为使线虫饥饿并减少 OP50-1 细菌的数量，在 20 摄氏度下孵育线虫三至四天。向刚经历饥饿处理的线虫平板中加入 5 毫升 M9 培养基，随后将 M9 培养基与线虫转移至无菌的 15 毫升离心管中，以 1,000 × g 离心沉淀 g 室温下持续30秒。

在 Nutator 上用含有 0.05% Triton X-100 的 10 毫升 M9 溶液洗涤线虫五次，每次 20 分钟，每次洗涤后弃去上清液。最后一次洗涤后，保留 100 微升溶液中的沉淀，小心不要扰动沉淀，将 M9 溶液和线虫转移至未接种细菌的 6 厘米 NGM 平板上。让平板干燥，同时让线虫在平板上爬行 20 分钟，以帮助去除体表和肠道内的 OP50-1。

当培养皿干燥后，加入 250 微升 M9，重复上述操作，将线虫转移至新的未接种的 6 厘米 NGM 培养皿中，使线虫在培养皿干燥期间能够爬行。

20 分钟后，向培养板中加入 250 µL M9 液体，并将 100 µL M9 液体连同线虫转移至洁净的表面皿中。

然后用一支26号规格的注射器针头固定线虫，再用另一支26号规格的注射器针头将其头部切除。

断头后，肠道、颗粒状组织以及透明的性腺会自然从线虫体部分离，随后切下一小段暴露的肠道，并将单个解剖得到的肠道转移至含有10微升无菌水的0.5毫升PCR管中。重复该操作，从至少五只不同的动物中收集肠道并分别放入PCR管中。

将 PCR 管在 -80 摄氏度下冷冻至少 5 分钟。在进行 PCR 和测序鉴定之前，需先解冻肠道样本。