0 次观看 • 3:04 分钟 • January 30th, 2026
从一株嗜肺军团菌（Legionella pneumophila）培养物开始，这是一种可释放外膜囊泡的革兰氏阴性致病菌。
这些外膜囊泡携带脂多糖和膜蛋白，可促进细菌的毒力。
离心培养物以沉淀完整的细菌。
收集含有OMVs的上清液，并再次离心以沉淀残留的细菌。
通过膜过滤上清液，以去除残留的细菌，同时保留外膜囊泡（OMVs）。
使用新的膜进行第二次过滤，以去除细菌碎片。
收集无菌滤液，并进行超速离心以沉淀外膜囊泡（OMVs）。
弃去上清液，将沉淀重悬于缓冲液中，再次进行超速离心，以去除松散结合的蛋白质和脂多糖。
去除上清液，并将纯化的外膜小泡重悬于缓冲液中。
将OMVs的等分试样划线接种于血琼脂和BCYE琼脂平板上，并进行培养。
未形成菌落证实无细菌污染。
将OMVs储存于低温条件下，用于宿主-病原体相互作用研究。
将剩余的液体培养物加入90毫升新鲜YEB培养基中，并在旋转摇床上培养，直至其OD600达到3.0至3.5。在4,000 g条件下离心20分钟，使细菌沉淀。然后将上清液转移至新的离心管中。
弃去细菌沉淀，再次离心样品，并重复离心步骤一次。随后，将剩余的上清液过滤除菌两次。
然后将去除了细菌的上清液转移至超速离心管中，在4摄氏度下以100,000 g 离心3小时。弃去上清液。接着使用无菌PBS重悬OMV沉淀，并将其合并。
重复超速离心步骤，以去除污染性蛋白质和游离的脂多糖（LPS）。随后，弃去上清液，并用无菌棉签将超速离心管内壁干燥。最后，用500 µL无菌PBS重悬外膜囊泡（OMV）沉淀。
然后，分别取20 µL划线接种至血琼脂和BCYE琼脂平板，以排除所制备囊泡的细菌污染。将血琼脂平板孵育过夜，BCYE琼脂平板孵育3天。