共渗透实验用于筛选抑制植物RNA沉默的病原效应子

取等体积混合的两种溶液 根癌农杆菌 悬浮液，每种携带一种质粒——一种编码GFP，另一种编码效应蛋白。

穿刺一个小孔，使用无针注射器将混合物注入健康、完全展开叶片的下表面 Nicotiana benthamiana 16c 叶片。

用柔软的纸巾轻轻吸去多余的悬液，以防止细菌过度生长。

标记侵染区域，并在最佳生长条件下培养植株。

Agrobacterium 将质粒DNA转移至植物细胞中，其中GFP和效应基因被转录为mRNA，并翻译成蛋白质。

植物的防御系统利用RNA沉默机制，将双链siRNA加载到RISC复合物中。随后， passenger链被移除，而guide链则引导该复合物降解靶标GFP mRNA。

然而，效应蛋白会结合siRNA，阻止其与RISC结合，从而使GFP荧光持续存在。

这使得能够鉴定出抑制植物RNA沉默的病原体效应子。

将含有35S绿色荧光蛋白的Agrobacterium菌液与含有35S黄瓜花叶病毒抑制因子2b、假定效应子或空载体的Agrobacterium菌液等体积混合。使用1毫升无针注射器，将混合的Agrobacterium悬浮液小心且缓慢地注入本氏烟（Nicotiana bethamiana）16c植株叶片的远轴面。

用软纸巾从叶片上除去残留的细菌悬浮液，并用记号笔圈出浸润区域的边缘。