在成年蚊子中建立明确的肠道细菌群落

从一个装有成年蚊子的纸杯开始，杯口用纱布封住以防止蚊子逃逸。

将浸有含抗生素蔗糖溶液的棉球置于纱布上，并用培养皿覆盖以保持湿度。

当蚊子取食时，它们会摄入抗生素，从而清除其内源性肠道微生物群。

移除棉球，并开始饥饿期，以清除蚊虫肠道中残留的抗生素。

取一支含有悬浮于添加了摄食刺激剂的蔗糖溶液中的细菌的试管，以刺激摄食。

取一个密封的饲喂装置，加入细菌悬液，并固定好。

将装置连接至预热的饲喂设备，并将其放置在装有饥饿处理后蚊虫的容器上方。

当蚊子摄食时，细菌会进入其肠道并定植，形成特定的菌群。

携带该细菌种群的饱血蚊子已可用于宿主-病原体相互作用研究。

将无菌棉球浸入含有抗生素的蔗糖溶液中，然后将其放置在含有蚊虫的纸杯顶部。

用直径10厘米的培养皿覆盖棉球，以防止水分蒸发。每天更换两次棉球，并连续三天饲喂蚊子。制备细菌溶液。使用紫外-可见分光光度计测定细菌溶液。向离心管中加入一个OD的细菌悬液。

在 4 摄氏度下，以 5,000 RCF 离心 5 分钟。

弃去上清液。用无菌 PBS 缓冲液洗涤菌体沉淀三次。用 200 微升无菌 PBS 缓冲液重悬菌体沉淀。取 600 微升 10% 蔗糖溶液、200 微升 ATP 和 200 微升细菌悬液加入新的 EP 管中，充分混匀。将制备好的细菌溶液缓慢加入饲喂装置中，至最大体积为止。

为避免气泡从单一方向产生并密封饲喂装置，连接电源。待温度升至37度后，将含有细菌溶液的饲喂装置安装到饲喂器上。在喂食细菌前，应停止喂食蚊虫24小时，以使其代谢掉抗生素。将装有蚊虫的纸杯置于饲喂装置上方，允许其吸食90分钟。充分吸食的蚊虫可被挑选出来用于后续研究。