活体成像斑马鱼胚胎中巨噬细胞在分枝杆菌感染过程中的细胞死亡

从表达荧光标记巨噬细胞的转基因斑马鱼胚胎开始，将其置于成像培养皿中的低熔点琼脂糖中。

通过显微注射将荧光标记的 Mycobacterium marinum注入中脑肌肉，使这些胚胎感染，从而引发局部免疫反应。

用含有麻醉药物的胚胎培养基覆盖已凝固的琼脂糖，以维持麻醉状态，并加入化学抑制剂以抑制色素沉着，确保成像时的光学清晰度。

将培养皿放入高分辨率共聚焦显微镜的环境培养箱中。

使用明场照明，定位感染区域。

激活荧光激光通道，设置Z轴层扫的起始和终止位置，并开始延时成像。

观察被荧光标记的细菌感染的巨噬细胞，其形态逐渐变圆并失去活动性。

这表明细胞骨架降解以及裂解性细胞死亡的开始。

随着时间推移，巨噬细胞肿胀并破裂，将胞质内容物和已摄入的细菌释放到周围组织中，这是炎性溶解性细胞死亡的典型特征。

待琼脂糖完全凝固后，用一层鸡蛋水覆盖琼脂糖。设置好环境培养箱后，将盛有斑马鱼的35毫米玻璃底培养皿放入环境培养箱中。打开405 nm二极管激光器、氩离子激光器（功率20%）和561 nm DPSS激光器。在光谱设置中调整至适当的激光功率。

选择 “XYZ”“连续扫描” 采集模式，并将图像格式设置为 “512 × 512 像素”。切换至 “实时数据模式”，定位第一条斑马鱼的位置，并标记 “开始” 和 “结束” 的 Z 轴位置。对剩余的每个胚胎重复此过程。在程序末尾添加一个 “暂停”。定义程序的循环与周期，并保存文件。