为何零假设检验对溶血表型验证具有重要意义？

零假设检验确保观察到的溶血活性在统计学上可归因于特定的金黄色葡萄球菌（S. aureus）菌株，而非随机变异，从而在早期发现工作流程中支持严谨的靶点验证。

在基于光密度（OD）的生长评估中，如何实现自变量的分离？

在OD测定过程中分离孵育时间、营养条件等变量，可使研究团队将细菌生长阶段的变化直接归因于实验干预，从而增强发现阶段数据的可信度。

定量OD测定在感染实验中具有什么作用？

定量的OD读数可精确控制细菌接种浓度，从而建立可重复的感染模型，并实现不同实验条件下宿主反应的可靠比较。

为何在跨功能感染研究中，重复性要求至关重要？

溶血表型筛选和光密度校准的重复性可确保感染实验在不同团队间的可重复性，从而促进跨功能数据整合和协作式实验开发。

在实施基于光密度（OD）的标准化之前，需要具备哪些统计分析能力？

团队必须应用统计学方法来验证光密度阈值和生长阶段的一致性，以确保标准化培养物符合下游研发应用的可重复性和质量标准。

为宿主-病原体相互作用研究制备溶血性Staphylococcus aureus培养物

JoVE Encyclopedia of Experiments

微生物学

0 次观看 • 2:43 分钟 • February 2nd, 2026

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从含有红细胞的加血选择性营养琼脂平板开始。

将革兰氏阳性致病菌Staphylococcus aureus （S. aureus）划线接种于琼脂平板上，并进行培养。

孵育期间，细菌利用营养物质生长并形成菌落。

S. aureus 分泌溶血素，这是一种成孔毒素，可裂解琼脂中的红细胞，在菌落周围形成清晰透明的区域，表明发生溶血。

选择一个溶血菌落，接种到营养肉汤中，并在旋转条件下培养以促进细菌生长。

使用分光光度计，通过测定光密度（OD）来确定细菌浓度。

根据 OD 读数，取适量菌液转移至新鲜营养肉汤中以稀释细胞，并在摇床水浴中孵育。

定期测量 OD 值。

OD 接近 0.8 表明细菌已进入生理状态均一的指数生长期。

这种溶血性 S. aureus 已准备好用于宿主-病原体相互作用研究。

从冷冻甘油菌种中将感兴趣的S.aureus菌株划线接种于血琼脂平板，37摄氏度培养16至24小时，通过观察其溶解红细胞的能力以及是否形成清晰透明的溶血环，以确认其溶血表型。

用无菌玻璃试管，将每种菌株的单菌落分别接种于4毫升胰蛋白胨大豆肉汤（TSB）中，在37摄氏度下以约70度倾斜角、70转/分钟的转速于试管旋转仪中培养16至24小时。次日早晨，使用分光光度计测定各培养物在600纳米处的光密度（OD₆₀₀），然后将细胞用无菌TSB稀释至OD₆₀₀为0.05，转移至125毫升DeLong摇瓶中，总体积为25毫升，即摇瓶体积与培养液体积之比为5:1。将培养物置于37摄氏度水浴中，以280转/分钟振荡培养。