斑马鱼胚胎感染后宿主-病原体相互作用的活体成像 脓肿分枝杆菌

从表达荧光标记巨噬细胞的麻醉后透明转基因斑马鱼胚胎开始。

将荧光标记的粗糙型脓肿分枝杆菌（Mycobacterium abscessus）预先注射到胚胎尾部肌肉中，以诱导局部感染。

这些细菌表面糖肽脂的缺失促进了它们的聚集。

将胚胎固定在低熔点琼脂糖中，并调整其方向以暴露感染部位。

琼脂糖凝固后，加入含有麻醉剂的养鱼水以维持麻醉状态并防止脱水。

通过荧光显微镜实时监测感染情况。

感染后，内源性巨噬细胞向细菌迁移并吞噬单个细胞。

然而，某些细菌会形成索状结构——即细长的细胞外聚集体，能够复制、扩散并抵抗吞噬作用，导致宿主细胞死亡和免疫细胞浸润。

尽管如此，免疫细胞仍无法清除这些索状结构，导致细菌和死亡的宿主细胞积聚并形成脓肿。

这揭示了cording是M. abscessus的一种关键免疫逃逸策略。

为了对M. abscessus感染进行活体成像，将经三卡因麻醉的胚胎置于35毫米玻璃底培养皿或单腔凹玻片中，其中含有1%低熔点琼脂糖，适用于倒置显微镜或直立共聚焦显微镜。将胚胎调整至所需位置，并在凝固的琼脂糖上覆盖含三卡因的养鱼用水。最后，使用配备10X物镜的荧光显微镜，或配备40X或63X物镜的荧光共聚焦显微镜，对胚胎进行连续荧光采集和透射光成像。