为什么线虫存活率的测量对靶点验证很重要？

通过反映毒素诱导的肠道损伤和全身毒性，线虫存活率的测定可定量评估细菌的毒力，从而实现菌株间的比较和靶点的风险评估。

营养受限培养基如何支持毒力评估？

营养受限的培养基可防止细菌过度生长，并模拟利于感染的环境条件，确保观察到的线虫死亡是由病原性引起，而非营养竞争或间接效应所致。

是什么实现了细菌菌株之间的定量比较？

在24、48和72小时计数活线虫，可获得生存率数据，通过作图评估相对毒力，从而实现对致病性与非致病性菌株的定量比较。

为什么复制要求对于跨职能协作至关重要？

在不同孔板和时间点进行重复实验可确保检测的可靠性和可重复性，这对于生成毒理学、微生物学和药理学团队在决策中可信的稳定数据至关重要。

实施前需要进行哪些统计分析？

生存率比较需要采用log-rank检验或ANOVA等统计分析方法，以确定不同菌株间的显著差异，确保观察到的毒力差异并非由实验变异性所致。

使用C. elegans液体毒性检测法评估细菌毒力

JoVE Encyclopedia of Experiments

微生物学

0 次观看 • 2:05 分钟 • February 26th, 2026

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取一个含非致病性细菌悬液的多孔板作为对照，以及多种致病性细菌菌株，以评估其相对毒力。

将细菌悬浮于营养受限的培养基中，以防止过度生长，并模拟利于感染的环境。

将L4期的C. elegans线虫加入每个孔中，并在持续振荡条件下孵育培养板，以增强细菌与线虫之间的接触。

这些蠕虫以细菌为食，细菌进入其肠道并在其中定植。

致病菌释放毒素，损害肠道组织，导致线虫出现全身性中毒并最终死亡。

孵育后，计数每个孔中的活体线虫，并绘制图表以评估其存活率。

线虫存活率的差异反映了每种细菌菌株的相对毒力。

按照前述方法培养Aeromonas菌株并测定其吸光度后，将细菌培养液在3,500g条件下离心15分钟。用S培养基调整细菌培养液浓度，然后将195微升含细菌的S培养基加入96孔板的八个孔中。用M9培养基将线虫从ENGM平板上冲洗下来，随后将线虫悬液浓度调整为每微升5条线虫。

向96孔板的每个孔中加入5 µL线虫溶液。将板子置于摇床上孵育，并在24、48和72小时时计数活线虫的数量。