JoVE 实验百科全书
微生物学
0 次观看 • 2:23 分钟 • March 31st, 2026
从含有已降解和未降解胞外多糖（EPS）的发酵上清液开始。
这些胞外多糖是在发酵过程中获得的，其中各上清液中不同的粪便细菌群落对胞外多糖的作用方式各不相同。
将上清液点样于预涂有极性固定相的薄层色谱板底部附近。
将板风干，然后放入含有移动相的展开 chamber 中，移动相的极性应低于固定相。
随着流动相的上升，胞外多糖根据其极性和大小进行迁移。
大分子且未降解的胞外多糖（EPS）与固定相有较强的相互作用，因而停留在起始位置附近。
较小的降解片段结合较弱，并随流动相向上迁移。
取出培养板并风干。
将平板浸入与胞外多糖（EPS）发生反应的碳水化合物染色试剂中。
将平板风干，然后加热以脱水EPS并形成有色条带。
在加样孔附近出现单一条带表明EPS未降解，而多条带则表明细菌对EPS造成了降解。
将0.2微升发酵上清液加样至每块预先包被的硅胶60薄层层析铝板上，并轻轻晃动以铺展。随后，使用热风电吹风干燥。
将样品板的一端浸入20毫升的甲酸：正丁醇：水溶液中数分钟，直至电泳迁移接近另一端。然后用镊子取出板子，用吹风机吹干。接着，将板子浸入间苯二酚试剂中两分钟进行染色，再进行干燥。
将平板转移至120摄氏度的烘箱中加热三分钟。然后拍摄平板图像，通过测量TLC条带来评估EPS的降解情况。