活细胞延时成像观察Bdellovibrio bacteriovorus对E. coli的捕食过程

从一个培养皿开始，其中含有蛭弧菌（Bdellovibrio bacteriovorus，一种捕食性细菌）与其猎物大肠杆菌（E. coli）的共培养物，置于琼脂糖垫下方。

琼脂糖垫可使 E. coli 固定不动，而 B. bacteriovorus 仍保持运动能力，并主动侵入猎物细胞。

捕食者表达一种红色胞质标记物，以及与DNA聚合酶亚基融合的绿色荧光标签，用于可视化观察。

将培养皿固定在支架中，并在培养皿底部和显微镜物镜上滴加浸油，以获得最佳分辨率。

将支架安装到显微镜上，并配置为双通道荧光检测模式。

使用明场光学显微镜定位焦平面，并选择多个不重叠的成像区域。

设置延时参数，以在指定时间间隔内依次捕获明场和荧光图像。

该方法能够观察捕食过程，从猎物附着和侵入开始，随后发生猎物细胞转化、丝状生长、形成隔膜、子代形成，最终以猎物细胞裂解结束。

对于共培养物的延时荧光显微镜观察，将培养皿置于培养皿支架中，确保实验过程中培养皿不会移动；在倒置显微镜的物镜上滴加一滴浸油，同时在培养皿底部也滴加一滴浸油。将支架安装到倒置显微镜腔室内的显微镜载物台上，在显微镜软件中将放大倍数设置为100倍，多色镜头设置为GFP和mCherry。使用目镜在明场下找到焦平面，并打开点位列表管理器。

移动载物台，使用标记点按钮记录至少10个感兴趣位置的坐标。将摄像头切换至显示器。设定焦平面，并在点列表管理器中点击替换点按钮以校准每个点。

打开实验设计器，取消勾选疾病叠加选项。选择适当的荧光通道和最佳照明设置，并设定图像采集间隔及实验总时长。为选定位置启用对焦维护功能，并选择用于自动保存图像文件的数据文件夹。

重新检查显微镜软件控制中的所有设置，并启动延时成像实验。实验开始一小时后，确认所有载物台位置仍处于聚焦状态。延时成像实验结束后，取出培养皿，并根据相应的生物安全规程丢弃带有琼脂糖垫的35毫米培养皿。