肠道定植与腹泻诱导 霍乱弧菌 在成年斑马鱼中

将成年斑马鱼置于无菌感染水中，并加入所需浓度的致病性Vibrio cholerae菌株。

用带孔的盖子盖住烧杯，以防止鱼跳出，并进行孵育。

斑马鱼摄入细菌后，细菌会到达肠道，利用其鞭毛穿过黏液层，并附着于上皮组织。

它们定植于上皮组织并分泌破坏肠道完整性的毒素，导致离子、液体和蛋白质外漏。

这些毒素还会触发上皮细胞分泌黏液，从而促进细菌的持续存在。

液体、黏液和肠内容物的积聚导致水样腹泻，可通过水体浊度升高进行检测。

孵育后，收集鱼类并将感染性水弃入消毒剂中。

将鱼转移到无菌水中以去除表面细菌。

收集鱼类并再次转移至无菌水中，以进行后续分析。

制备霍乱弧菌（V. cholerae）培养物后，通过浸浴法接种斑马鱼。首先，将四到五条斑马鱼放入含有200毫升无菌感染用水的400毫升烧杯中，然后加入1毫升目标感染浓度的V. cholerae培养物。

然后，用带孔的盖子盖住烧杯。在准备好所有烧杯后，将其转移至设定为 28 摄氏度的玻璃门培养箱中。对于短暂暴露处理，约六小时后，通过渔网将烧杯中的水倒出以收集鱼类。感染性废水必须用漂白剂处理，以杀死细菌。

然后，将鱼放入200毫升无菌感染水中浸泡5分钟。5分钟后，用滤网过滤该溶液，并将废液倒入含漂白剂的容器中处理。此时，可将鱼转移至含有200毫升无菌感染水的新洁净烧杯中。