0 次观看 • 2:45 分钟 • March 31st, 2026
在对照条件下,取在含有E. coli的营养丰富的琼脂平板上培养的C. elegans线虫;在病原体条件下,取在含有铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)的琼脂平板上培养的线虫。
孵育期间,线虫以定植于肠腔内的细菌为食。
在对照组中,肠上皮保持完整,而病原体释放的毒素导致上皮损伤。
用缓冲液清洗线虫,并转移至添加了荧光示踪剂和热灭活细菌作为食物来源的培养板中。
在对照组中,摄入的荧光示踪剂保留在肠道内;而在病原体感染的线虫中,这些示踪剂会穿过受损的上皮组织进入体腔。
再次清洗线虫,并将其放置于新鲜的培养板上。然后将它们转移到含有固定剂的多孔检测板中,以保存细胞结构。
去除固定剂,然后加入封片剂用于成像。
使用荧光成像系统进行观察。
P. aeruginosa 感染的线虫体腔内荧光增强,表明病原体诱导了肠道通透性增加。
用 S 缓冲液洗涤同步化年龄的 L4 幼虫,并将约 500 条线虫转移至含有不同细菌和化学物质的 NGM 平板上。随后,将平板在 20 摄氏度下孵育 48 小时。
通过将 2 毫升热灭活的大肠杆菌(E. coli)与 4 毫克 FITC-葡聚糖混合,制备添加 FITC-葡聚糖的平板。将 100 微升该混合物加入 20 个新的 NGM 琼脂平板中,置于洁净的实验台上干燥 1 小时。处理 48 小时后,用 S 缓冲液清洗线虫,将其转移至添加 FITC-葡聚糖的平板以及不含 FITC-葡聚糖的 NGM 平板中,并在其中过夜培养。
第二天,用 S 缓冲液清洗线虫,并将其转移至新鲜的 NGM 琼脂平板上爬行 1 小时。向黑色 96 孔平底板的每个孔中加入 50 微升 4% 多聚甲醛,然后将约 50 条线虫转移至各孔中。1 至 2 分钟后,吸除所有多聚甲醛,并向每个孔中加入 100 微升封片介质。
本方案展示了在秀丽隐杆线虫(C. elegans)暴露于细菌病原体后,对其肠道通透性的评估方法。了解细菌如何影响肠道完整性,对于深入理解宿主与病原体之间的相互作用至关重要。
在细菌暴露后对秀丽隐杆线虫(C. elegans)肠道通透性进行定量评估,为研究病原体攻击下上皮屏障完整性的机制提供了可靠的模型。该基于荧光的检测方法可实现宿主-病原体相互作用研究中的早期靶点验证和机制层面的风险排除,有助于提升临床前研究的预测可信度。此方法对于致力于从发现生物学向与疾病相关的系统建模实现转化连续性的生物制药团队具有直接应用价值。
这种基于荧光的通透性检测方法位于从发现到临床前研究的连续过程中,连接了早期的机制性研究与转化模型的开发。
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最后更新:22 八月 2026