细菌暴露后对 C. elegans 肠道通透性的评估

0 次观看2:45 分钟 • March 31st, 2026

在对照条件下,取在含有E. coli的营养丰富的琼脂平板上培养的C. elegans线虫;在病原体条件下,取在含有铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)的琼脂平板上培养的线虫。

孵育期间,线虫以定植于肠腔内的细菌为食。

在对照组中,肠上皮保持完整,而病原体释放的毒素导致上皮损伤。

用缓冲液清洗线虫,并转移至添加了荧光示踪剂和热灭活细菌作为食物来源的培养板中。

在对照组中,摄入的荧光示踪剂保留在肠道内;而在病原体感染的线虫中,这些示踪剂会穿过受损的上皮组织进入体腔。

再次清洗线虫,并将其放置于新鲜的培养板上。然后将它们转移到含有固定剂的多孔检测板中,以保存细胞结构。

去除固定剂,然后加入封片剂用于成像。

使用荧光成像系统进行观察。

P. aeruginosa 感染的线虫体腔内荧光增强,表明病原体诱导了肠道通透性增加。

用 S 缓冲液洗涤同步化年龄的 L4 幼虫,并将约 500 条线虫转移至含有不同细菌和化学物质的 NGM 平板上。随后,将平板在 20 摄氏度下孵育 48 小时。

通过将 2 毫升热灭活的大肠杆菌(E. coli)与 4 毫克 FITC-葡聚糖混合,制备添加 FITC-葡聚糖的平板。将 100 微升该混合物加入 20 个新的 NGM 琼脂平板中,置于洁净的实验台上干燥 1 小时。处理 48 小时后,用 S 缓冲液清洗线虫,将其转移至添加 FITC-葡聚糖的平板以及不含 FITC-葡聚糖的 NGM 平板中,并在其中过夜培养。

第二天,用 S 缓冲液清洗线虫,并将其转移至新鲜的 NGM 琼脂平板上爬行 1 小时。向黑色 96 孔平底板的每个孔中加入 50 微升 4% 多聚甲醛,然后将约 50 条线虫转移至各孔中。1 至 2 分钟后,吸除所有多聚甲醛,并向每个孔中加入 100 微升封片介质。

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最后更新:22 八月 2026