制备用于建立小鼠复发性尿路感染模型的Gardnerella vaginalis接种物

取一株对抗生素耐药的G. vaginalis储备菌株，该菌为一种与小鼠尿路感染相关的厌氧细菌。

在初次膀胱感染期间，尿路致病性 E. coli 会在膀胱上皮细胞内建立静息储存库。

随后暴露于G. vaginalis会触发毒素介导的表层细胞脱落，从而使休眠的UPEC重新出现并导致复发性尿路感染。

为制备G. vaginalis接种物，将菌种划线接种于不含抗生素的营养琼脂平板上，以促进细菌复苏。

在厌氧条件下孵育，以获得活跃生长的菌落。

用接种环取大量菌落转移至不含抗生素的营养肉汤中。

在厌氧条件下静置培养，直至达到所需细菌浓度。

测量光密度以估算浓度。

将悬液转移至离心管中，离心以沉淀细菌，弃去上清液，并用缓冲液重新悬浮。

制备系列稀释液，并将其接种于含抗生素的培养基上，以选择性培养 G. vaginalis 并防止污染。通过计数菌落来确定接种物浓度。

首先将G. vaginalis 菌株从-80°C冰箱冻存管中取出，转移至厌氧培养箱中进行复苏。将细菌划线接种于不含抗生素的NYCIII平板上。将平板置于37°C厌氧条件下培养24小时。

在厌氧培养箱中，用接种环取一微升NYCIII平板上的菌体，接种于5毫升厌氧NYCIII培养基中，在37摄氏度厌氧条件下静置培养18小时。培养基中不添加抗生素。使用分光光度计测定菌液在600 nm处的光密度（OD₆₀₀）。

然后在 9,600 × g 条件下离心一分钟，并吸除上清液。用 PBS 将菌体沉淀重悬至所需浓度，随后对菌液进行连续稀释并涂布平板。