一种用于研究致病性转变的小鼠模型 肺炎链球菌 继发性病毒感染

以在缓冲液中悬浮的生物膜培养的Streptococcus pneumoniae（肺炎链球菌）开始，该菌为无症状的鼻咽部定植菌

将悬浮液经鼻给予未麻醉的小鼠，使其吸入上呼吸道。

在鼻咽部上皮中，细菌形成生物膜，促进定植并抑制宿主细胞产生抗病毒细胞因子。

麻醉后，伸展小鼠的舌头以暴露气管。

将甲型流感病毒注入气管，以感染下呼吸道。

小鼠苏醒后，立即通过鼻内接种病毒，以靶向其上呼吸道。

病毒感染会破坏宿主免疫系统并损伤黏膜组织，导致细菌扩散至下呼吸道。

在病毒改变的肺部环境中，细菌转变为侵袭性病原体，引发肺部炎症和全身性扩散。

该感染还会抑制中性粒细胞功能，降低细菌清除能力。

这种共感染模型可用于研究宿主与微生物之间的相互作用。

将已形成生物膜的分装样品置于冰上解冻，然后在1,700 g 离心5分钟。小心移除并弃去上清液，避免扰动沉淀。随后，用1毫升PBS重悬沉淀并再次离心。弃去上清液，将沉淀重悬于所需体积的溶液中，以达到目标浓度。

将稀释后的接种物各5微升滴入C57黑鼠六号雄性小鼠的两个鼻孔，每侧鼻孔接种5 × 10⁶菌落形成单位（CFU）。接种后，牢固握住小鼠并固定其头部，直至液体完全吸入。病毒解冻后，用PBS将其稀释至所需浓度。

在麻醉前，将眼用润滑剂涂抹于小鼠眼部。麻醉后立即使用钝头镊子将小鼠舌头拉出口腔，通过气管内滴注50微升含20个噬斑形成单位（plaque-forming units，PFU）的甲型流感病毒（influenza A virus，IAV）。恢复后，采用前述接种方法，经鼻腔接种10微升含200 PFU的IAV。