小鼠共感染模型中感染组织的处理及细菌计数

从一只同时感染了致病性细菌和病毒的小鼠开始。

该病毒会损伤小鼠上呼吸道的上皮内层，促进细菌从鼻咽部向肺部扩散。

将收获的小鼠肺组织放入含有磷酸盐缓冲液（PBS）的培养皿中。

将肺组织切碎成小块并充分混匀。

将一半的肺组织转移至含有 PBS 的试管中。

将灭菌的组织匀浆器探头放入含有肺组织的试管中。

将组织匀浆以释放细菌至 PBS 中。

将匀浆稀释，并将稀释液接种到营养丰富的琼脂平板上。

孵育培养板，使细菌菌落形成。

计数这些菌落以量化肺部细菌载量，该指标反映肺部的细菌负荷。

采集肺组织时，使用解剖剪剪开暴露的肋骨两侧，轻轻将肋骨向上朝小鼠头部方向提起，以暴露心脏。将连接在预先装有PBS的10毫升注射器上的25号针头插入右心室，开始缓慢灌注。观察肺组织是否出现漂白现象，以此作为灌注成功的指标。

缓慢灌注，避免破坏肺组织。用镊子提起心脏，并剪开以分离肺和心脏。分离后，用镊子夹起肺的所有叶，于含无菌 PBS 的培养皿中冲洗，以去除任何残留血液。

在培养皿中，将肺组织切碎成小块并充分混匀。取出一半肺组织混合物用于测定细菌菌落形成单位（CFU）或病毒空斑形成单位（PFU），将其置于预先加入 0.5 毫升 PBS 的圆底 15 毫升离心管中，用于匀浆处理。

为均质化采集的组织，先将匀浆器探头浸入70%乙醇中，并以60%功率开启匀浆器运行30秒进行清洗。随后在无菌水中重复此步骤10秒。

每份组织匀浆1分钟。为计数细菌数量，将系列稀释液接种于血琼脂平板上。计算总菌落形成单位（CFU）时，使用10 µL进行涂布，并记录每份样本的最终体积（单位为mL）。在37°C和5%二氧化碳条件下培养过夜。