小鼠共感染模型中细菌计数中感染组织处理

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从一只同时感染致病细菌和病毒的小鼠开始。

病毒损伤小鼠上呼吸道的上皮衬里,促进细菌从鼻咽部向肺部扩散。

将采集的小鼠肺放入含有磷酸盐缓冲盐水(PBS)的皿中。

将肺切成小块,充分搅拌。

将半个肺组织转移到含有PBS的管子中。

将一个消毒过的组织均质探头放入装有肺组织的管内。

将组织均质化,释放细菌进入PBS。

稀释均质物,并将稀释物置于富含营养的琼脂培养皿上。

孵育平板以形成细菌菌落。

统计这些菌落以量化肺部细菌负荷,这反映了肺部细菌的负荷。

肺部采集时,使用解剖剪刀切断裸露肋骨的侧面,轻轻将肋骨拉向小鼠头部,露出心脏。将一根25号针头连接到预装PBS的10毫升注射器,插入右心室,开始缓慢灌注。观察肺部漂白情况,作为灌注成功的指标。

冲洗时要慢慢冲洗,以避免破坏肺组织。用产钳抬起心脏,切开肺和心脏。分离后,用镊子取出肺部所有叶,并用无菌PBS冲洗,去除残留血液。

在培养皿中,将肺切成小块搅拌均匀。取出一半肺混合物以确定细菌CFU或病毒PFU,并将其放入一个圆底15毫升管中,管内预装0.5毫升PBS进行均质化。

要均匀化收集的组织,将均质探针放入70%乙醇中,并以60%功率启动均质器30秒。在无菌水中重复此步骤10秒。

将每组组织均质化1分钟。为了计数细菌数量,可以将血琼脂平板上的序列稀释图块进行列举。计算总CFU时,使用10微升进行电镀,并记录每个样品的最终体积(毫升单位)。在37摄氏度、5%二氧化碳下孵育一夜。

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Last updated: 18 July 2026