小鼠共感染模型中感染组织的处理及细菌计数

0 次观看3:16 分钟 • March 31st, 2026

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从一只同时感染了致病性细菌和病毒的小鼠开始。

该病毒会损伤小鼠上呼吸道的上皮内层,促进细菌从鼻咽部向肺部扩散。

将收获的小鼠肺组织放入含有磷酸盐缓冲液(PBS)的培养皿中。

将肺组织切碎成小块并充分混匀。

将一半的肺组织转移至含有 PBS 的试管中。

将灭菌的组织匀浆器探头放入含有肺组织的试管中。

将组织匀浆以释放细菌至 PBS 中。

将匀浆稀释,并将稀释液接种到营养丰富的琼脂平板上。

孵育培养板,使细菌菌落形成。

计数这些菌落以量化肺部细菌载量,该指标反映肺部的细菌负荷。

采集肺组织时,使用解剖剪剪开暴露的肋骨两侧,轻轻将肋骨向上朝小鼠头部方向提起,以暴露心脏。将连接在预先装有PBS的10毫升注射器上的25号针头插入右心室,开始缓慢灌注。观察肺组织是否出现漂白现象,以此作为灌注成功的指标。

缓慢灌注,避免破坏肺组织。用镊子提起心脏,并剪开以分离肺和心脏。分离后,用镊子夹起肺的所有叶,于含无菌 PBS 的培养皿中冲洗,以去除任何残留血液。

在培养皿中,将肺组织切碎成小块并充分混匀。取出一半肺组织混合物用于测定细菌菌落形成单位(CFU)或病毒空斑形成单位(PFU),将其置于预先加入 0.5 毫升 PBS 的圆底 15 毫升离心管中,用于匀浆处理。

为均质化采集的组织,先将匀浆器探头浸入70%乙醇中,并以60%功率开启匀浆器运行30秒进行清洗。随后在无菌水中重复此步骤10秒。

每份组织匀浆1分钟。为计数细菌数量,将系列稀释液接种于血琼脂平板上。计算总菌落形成单位(CFU)时,使用10 µL进行涂布,并记录每份样本的最终体积(单位为mL)。在37°C和5%二氧化碳条件下培养过夜。

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最后更新:22 八月 2026