生成具有屏障功能的人类结肠类器官单层以研究宿主-病原体相互作用

从一个含有胶原蛋白包被的多孔板小室插入物开始。

向孔中加入扩增培养基。

培养基中的营养成分促进细胞增殖，而分化抑制剂则维持细胞的干细胞样状态。

将源自结肠干细胞培养物的上皮细胞簇悬液加入小室插件中，并进行孵育。

细胞会黏附在包被有胶原的表面，并从上、下两个腔室中获取营养物质。

这些抑制剂可阻止细胞分化，并促进细胞簇的增殖。

使用相差显微镜观察培养物。

单层细胞形成后，将培养基更换为不含细胞分化抑制剂的新鲜培养基。

这有助于细胞分化为具有紧密连接的成熟结肠上皮细胞。

这些细胞分泌黏液，并形成具有功能性的单层结构，可模拟生理状态下的肠道屏障，用于宿主-病原体相互作用研究。

用移液器向每个插入物下方加入600微升扩增培养基。从冻存管中吸取100微升细胞悬液，加入每个插入物中。

将培养板放回组织培养孵箱中，静置至少12小时，避免振荡或剧烈倾斜。孵育完成后，将培养板置于配备2.5倍至10倍物镜的相差光学显微镜上。

用不含抑制剂的培养基更换培养液，以终止抑制处理。此后每两到三天更换一次培养基，直至细胞融合。