0 次观看 • 4:02 分钟 • February 26th, 2026
取含有细胞分裂阻断抗生素的培养基。
用杆状革兰氏阴性细菌接种。
振荡孵育。
在抗生素存在下，细菌持续生长但不分裂，形成细长的丝状结构。
收集培养物并在低温下离心。弃去上清液，并用蔗糖溶液洗涤丝状物以防止裂解。
弃去蔗糖溶液。
加入缓冲液，随后加入酶和EDTA。EDTA可削弱外膜，使溶菌酶进入并降解肽聚糖层。
这会去除细胞壁，使细菌细胞收缩。DNase I 可降解细胞释放的染色体 DNA，防止细胞聚集。
加入低渗溶液并轻轻摇晃，使细胞吸水膨胀。
柔性膜使细胞能够形成一种称为球状体的球形结构。
将含有原生质球的等分试样转移至两支含有预冷等渗溶液的试管中，以稳定原生质球。
为了制备革兰氏阴性大肠杆菌（E.coli）原生质球，将过夜培养物按1:100的比例稀释于250毫升锥形瓶中的25毫升TSB培养基中，并将细菌放回摇床培养箱继续培养2.5小时。当溶液在600纳米处的光密度达到0.5至0.8时，在新的250毫升锥形瓶中将培养物按1:10的比例稀释于新鲜TSB培养基中，进行第二次2.5小时的培养，同时加入头孢氨苄，使其最终有效浓度为60微克/毫升。
在1000倍光学显微镜下观察，可获得长度约为50至150微米的单细胞丝状体。离心细菌溶液以收集丝状体，并倾去上清液。轻轻加入1毫升0.8摩尔蔗糖溶液洗涤丝状体，注意不要扰动沉淀。
一分钟后，弃去上清液，注意不要扰动沉淀，然后按指定顺序向纤维中加入相应的试剂。室温孵育十分钟后，在一分钟内逐渐加入一毫升溶液A，同时用手轻轻旋转混匀。室温孵育四分钟后，将纤维悬液均分为两份，分别加入两个含有七毫升4°C溶液B的15毫升锥形管中。接下来，通过离心沉淀纤维，并使用移液管小心吸除上清液，仅保留一至两毫升上清液，注意不要扰动沉淀。
使用 p1000 移液器轻轻重悬沉淀。通过光学显微镜检查样品的小份 aliquot，观察原生质球的形成情况。原生质球可在 -20 摄氏度下保存长达一周，或直至经历三次冻融循环。