建立阴道B族链球菌小鼠模型 链球菌 感染

取一培养物，为B族链球菌（Group B Streptococcus）或GBS，一种机会性细菌病原体。

用新鲜培养基稀释菌液并进行培养，以获得处于活跃分裂状态的细菌。

将培养物转移至锥形管中。

离心以沉淀细菌，然后弃去上清液。

用缓冲液洗涤细菌。

再次离心，移除上清液，并将细菌重悬于缓冲液中。

接下来，使用经激素处理且阴道上皮已处于易感状态的雌性小鼠，其更易受到感染。

固定小鼠。使用细小的移液器吸头，将GBS悬液注入阴道腔内。

松开小鼠，提起其尾巴，让前肢在坚固的表面上行走。

这有助于促进接种物在阴道腔内的滞留，从而促进GBS的黏附。

检查阴道口是否有接种物回流。

黏附的细菌定植于阴道上皮表面并建立感染。

已准备好用于进一步研究的阴道感染小鼠模型。

在注射当天，于37°C条件下，在Todd Hewitt肉汤（THB）中培养5毫升目标GBS菌株的过夜液体培养物。

次日早晨，将GBS按1:10的体积比转接至新鲜的THB培养基中，在37摄氏度下孵育2至3小时，直至细菌达到对数生长中期。然后将转接后的培养物转移至无菌的15毫升锥形管中，离心收集菌体。用200微升无菌PBS重悬菌体沉淀。

然后，用 PBS 将悬浮液总体积补足至每 10 只小鼠 1 毫升，在新的 5 毫升培养管中使 OD₆₀₀ 达到 0.4。将菌液转移至新的 15 毫升离心管中，重新离心收集细菌。随后，用相当于原始体积十分之一的 PBS 重悬菌体。

留取50微升细菌用于系列稀释，并接种于THB琼脂平板，以确定接种物的准确CFU。然后，用200微升凝胶加样枪头吸取10微升GBS，用手拇指和食指捏住第一只动物颈部背侧松弛的皮肤以固定，同时固定其尾部。将枪头插入阴道腔5至10毫米深处，缓慢排出全部接种液体积。

然后立即松开背部皮肤，并抬起尾巴以抬高动物的后躯，同时让其前肢在硬质表面上行走。一分钟后，目视检查阴道开口处是否有接种物回流。