利用斑马鱼模型评估宿主免疫在分枝杆菌感染中的作用

取麻醉后的野生型斑马鱼和缺乏淋巴细胞的免疫缺陷型斑马鱼。

将每条鱼腹侧朝上放置于湿润海绵上切出的切口中，以维持其活性。

将Mycobacterium marinum注入腹腔，以建立模拟人类结核病的全身性感染模型。

注射后，将鱼转移至新鲜的水族箱水中以恢复，并进行观察。

在野生型鱼类中，炎症反应会形成由细菌、受感染的巨噬细胞和淋巴细胞组成的肉芽肿。该肉芽肿可限制细菌，防止其扩散。

淋巴细胞分泌细胞因子，增强巨噬细胞的抗菌功能，从而实现细菌杀伤。

在免疫功能低下的鱼类中，肉芽肿缺乏淋巴细胞。因此，巨噬细胞保持部分活化状态，使细菌得以存活、复制并扩散，最终导致鱼类死亡。

生成生存曲线图。免疫功能低下鱼类的高死亡率凸显了淋巴细胞在控制感染中的作用。

首先，将5微升稀释后的细菌溶液用移液器滴加到一片石蜡膜上。然后，用30号胰岛素针头吸取液滴。

本实验使用五至八月龄的鱼类，其中一尾为野生型鱼，另一尾为 rag 突变体鱼。将这些鱼腹侧朝上置于湿润的泡沫塑料的切口内。在盆鳍之间以 45 度角注射胰岛素针头。

保持针头开口朝上，以确保整个开口均位于腹腔内。然后，缓慢注射菌液。操作完成后，小心拔出针头，并立即将鱼转移至盛有新鲜养殖水的恢复缸中。

每15分钟从正在使用的细菌等分试样中取样，接种于7H10平板上。将这些样品在29摄氏度下培养五天，以验证感染剂量。定期检查鱼类的健康状况，若发现感染症状的鱼，应将其置于含有超过0.02% 3-氨基苯甲酸乙酯的水中进行安乐死。