可视化感染小鼠膀胱中的胞内细菌群落

从一个已固定并解剖、且预先感染了表达β-半乳糖苷酶的尿路致病性E. coli的小鼠膀胱开始，将其置于硅胶包被的多孔板中。

膀胱的腔面向上，暴露出含有胞内细菌群落（IBCs）的上皮细胞。

用缓冲液冲洗膀胱，以去除碎片和未附着的细菌。

接下来，加入固定剂并孵育，以保存细胞和细菌结构。

去除固定剂，并用缓冲液洗涤。

然后，用含有去污剂的缓冲液洗涤，以通透细胞和细菌膜。

移除缓冲液，然后加入含有氧化还原试剂的 X-gal 溶液（β-半乳糖苷酶的底物），并进行孵育。

X-gal 和氧化还原试剂进入细菌。β-半乳糖苷酶切割 X-gal，产生一种无色中间产物，该产物被氧化还原试剂氧化后形成蓝色沉淀。

在解剖显微镜下，膀胱中的蓝色斑点证实了胞内细菌群落（IBCs）的存在，表明存在尿路感染。

进行膀胱内细胞（IBC）计数时，摘取膀胱后将其置于含 PBS 的 6 孔板硅化孔中，并用剪刀将其剪成两半。

使用置于最外侧边缘的小型金属针，轻轻撑开膀胱，使膀胱腔朝上，并充分暴露最大面积的尿路上皮。按照文本方案进行X-gal染色后，在解剖显微镜下观察呈蓝色点状的胞内细菌群落（IBC）。