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从安装在显微镜台上的微流控装置开始。
该装置由一个聚合物玻璃组件组成,外面包围一个微通道,带有模仿多孔介质的圆柱形柱。
注射器泵通过带滤网的注射器将培养基输送到通道,通道通过出口管道排入废物容器。
用连接到通道的传感器监测基准流体压力。
将出口管放入含有细菌悬浮液的小瓶中。
反向流动直到懸浮液充满通道,同时过滤器防止细菌进入注射器。
孵育后,使细菌细胞能够附着在表面、增殖并启动生物膜形成。
然后,取下过滤器,将出口重新放回废水容器。
恢复介质流动,监测生物膜生长并阻塞通道的压力。
拍摄缩时显微镜图像,以可视化生物膜随时间的生长。将生物膜生长与压力变化相关研究多孔介质中的生物堵塞现象。
在实验开始前三小时打开显微镜的箱式保温箱,以确保温度稳定在25摄氏度。
将进出口管连接到微流控装置。通过将外径为0.6毫米的针插入入口管内,固定管子与注射器的连接。将微流控装置、30毫升去离子水和30毫升培养基放入真空干燥器中,进行至少一小时的脱气。
完成后,缓慢将培养基和去离子水分别倒入两支30毫升注射器中。然后,将微流控装置安装在显微镜上,并将出口管放入废物容器中。将装满去离子水的注射器连接到微流控通道,通过微流控管路,缓慢注入水直到水从压力传感器出口流出。
将压力传感器注满水,冲洗连接微流控通道和压力传感器的管道中的所有气泡。用专用螺丝关闭压力传感器的出口。用去离子水填充剩余的微流控通道。
接着,在培养基注射器上放置一个1.2微米的滤纸。取出水注射器,小心地将注射器连接到入口微流控管。将注射器安装在注射泵上后,用培养基以每小时2毫升的流量冲洗通道,持续一小时。
然后,在实验过程中将注射器泵设置为所需的流量,并将压力传感器的压力读数设为零。接着,将1毫升光密度0.1、波长600纳米、1.5毫升离心瓶中培养的 Bacillus subtilis NCIB 3610培养液移液管。要将细菌培养液装入微流控通道,将出口管放入离心瓶,等待五分钟以清除管子出口中可能存在的气泡。
完成后,以每小时1毫升的流量抽取150微升细菌溶液,直到微流控通道被细菌培养物填满。然后,小心取下培养基注射器过滤器,将出口放入废物容器。将细菌细胞置于微流控通道中零流状态三小时,使其表面附着于多孔介质中。
开始实验时,先将注射器泵设置为所需的流量,并以1赫兹开始压力读数,然后在所需时间间隔、光学构型和放大倍率下获取生长中的生物膜图像。