一种用于研究共培养中微生物相互作用的体外实验方法

从生物测定平板开始，其中一个平板的营养琼脂左侧已预先接种了Corynebacterium propinquum，另一个平板则仅含有营养琼脂。

接下来，取一个含有致病性Staphylococcus菌悬液的多孔板。

将接种环浸入孔板中的Staphylococcus培养液，使其尖端浸入培养物中。

轻轻旋转印模，然后提起并检查每个接种针尖是否带有均匀的液滴，以确保接种的一致性。

将印模与生物测定板的右侧对齐，避免接触已有的菌落。

移除印模，使Staphylococcus接种液斑点留在琼脂表面。

在仅含琼脂的平板上重复印迹，以获得单菌落培养物。将平板倒置培养。

在共培养中，C. propinquum 会分泌铁载体，即一类从小分子，可从琼脂中螯合铁元素，从而抑制Staphylococcus的生长。

孵育后比较 金黄色葡萄球菌 共培养与单培养中的生长情况。

共培养中显著的抑制作用表明这两个物种之间存在相互作用。

在完成生物测定板六天的孵育后，按先前所述方法制备目标生物的过夜培养物。通过向空的12孔板的每个孔中加入1.8毫升BHI和200微升目标生物的过夜培养物，制备目标板。将无菌接种印章放入目标板中。

轻轻晃动培养物，使其在孔内旋转，确保不会交叉污染邻近的孔。提起接种印章，检查每个印章尖端是否均带有稀释后的目标培养物液滴。将接种印章放置在未接种的生物测定板上，轻轻摇动印章，使培养物液滴接种到每个孔中。

移除接种印章后，应在孔中可见培养液滴。若某些孔未通过接种印章接种，则使用移液器向这些孔中各加入3 µL稀释后的过夜培养液。随后，按照之前所述方法接种生物测定板，但需将印章的尖端对准12孔板的右侧，确保印章不接触已有的细菌菌落。小心移除印章，并将其放回目标板中。

如果琼脂在孔中凝固不均匀，可轻轻前后摇动印模，但需注意不要使印模移位至测试生物的生长区域。

对每一块生物测定平板重复接种操作，直至所有平板均完成接种，然后将平板倒置，在适当温度下孵育七天。

将测试生物与目标生物共培养一周后，根据肉眼观察对相互作用进行评分。若目标生物的生长情况与单培养相比无明显差异，则该孔记为零分；若生长减弱，则记为一分；若无生长，则记为二分。