利用活菌计数法评估病原细菌对番茄幼苗根部的定殖情况

取装有在无菌沙中培育的番茄幼苗的容器。

将幼苗根部接种产纤维素的野生型或不产纤维素的突变型植物致病细菌菌株。

从一个容器上取下密封材料，将其倒置在无菌纸上，轻敲以释放含有植物的沙柱。

沿纵向切开沙柱以暴露根部。

然后，将根浸入无菌缓冲液中并轻轻振荡，以去除松散附着的细菌。

对另一条根重复此过程。

将洗涤后的根转移至新鲜缓冲液中。进行超声处理，以释放紧密附着的细菌。

使用这些超声处理后的悬浮液进行系列稀释，涂布于琼脂平板上，并进行培养，以使存活的细菌形成菌落。

与纤维素缺陷型突变株相比，野生型菌株具有更高的可存活计数，突显了纤维素纤丝在促进细菌黏附根表面过程中的关键作用。

为了测定在沙土中生长的植物所携带的可存活细菌数量，首先需移除容器顶部和底部的密封材料。

将容器置于无菌纸上，轻轻敲击容器底部，使沙子松动，然后小心地将带植物的沙子从容器中取出。

当沙柱和植物在纸上自由放置时，将沙子从中间切开以露出植物根部。如有需要，可同时采集容器边缘附近以及根部附近的沙子样品。这有助于确定细菌的扩散、聚集和生长情况。

取出根部，将其浸入定量的水或缓冲液中，轻轻振荡，以去除松散附着的沙粒和细菌。通过将所得悬液涂布于合适的培养基（如LB琼脂）上，测定其中细菌的活菌数量。该数值代表与根部松散结合的细菌数量。最后，通过超声处理去除紧密结合的细菌，并测定其数量。