癌性上皮细胞感染 Shigella 过程中的应激颗粒形成

从一个含有贴壁癌变上皮细胞的多孔板开始，细胞生长在盖玻片上。

加入志贺氏菌（Shigella flexneri），一种致病性细菌。

离心培养板以促进细菌与细胞的接触，然后孵育。

利用一种特殊的分泌系统，Shigella 将毒力蛋白注入上皮细胞中。

这些毒力蛋白可调节上皮细胞的信号系统，促进细菌的摄取。

在细胞内，细菌继续分泌毒力蛋白，这些蛋白会破坏细胞的翻译过程，并导致未翻译的 mRNA 积累。

RNA结合蛋白和信号蛋白与非翻译的mRNA聚集，形成无膜的细胞质颗粒，称为应激颗粒。

弃去培养基，并清洗以去除未贴附的细菌。

接着，加入预热的培养基，培养基中需添加庆大霉素以消除表面附着的细菌。

加入固定剂以保存细胞结构和应激颗粒。

弃去固定液，并轻轻振荡洗涤以去除残留的固定液。

细胞已准备好进行免疫荧光染色以进行可视化 志贺氏菌诱导的应激颗粒。

每孔加入 500 µL 感染培养基替代洗涤液，然后离心 24 孔板，使细菌沉淀至细胞表面。

将已沉淀的细菌共培养物转移至37摄氏度的组织培养孵箱中孵育30分钟，以促进宿主细胞感染。

孵育结束后，用1毫升新鲜的37摄氏度HeLa培养基洗涤三次，每次洗涤去除细胞外源细菌。

然后，用含有庆大霉素的1毫升新鲜培养基覆盖感染的细胞，并将培养板放回细胞培养箱中。

孵育1小时后，完全吸除上清液，并在0.5毫升室温的含4%多聚甲醛的PBS溶液中固定样本30分钟。

接下来，将固定液弃入适当的废液容器中，并用 1 毫升 Tris 缓冲盐水轻轻振荡洗涤盖玻片 2 分钟。