小鼠肾脏组织中细菌定植的荧光成像

从一只感染了经基因改造的革兰氏阳性细菌的小鼠肾脏开始，这些细菌定植于组织并形成病灶。

所有细菌细胞均表达红色荧光，而病灶特异性的宿主条件可使特定细胞中表达绿色荧光蛋白。

用固定剂处理肾脏，并在避光条件下孵育，以保存组织结构并部分通透细胞膜。

将器官包埋于适当的介质中，冷冻后切成薄片组织切片。

将切片置于带电荷的玻片上以使其粘附。

使用细胞核染料对组织进行染色。

染料可穿透宿主细胞和细菌细胞，并与DNA结合。

将盖玻片置于组织上，然后在荧光显微镜下使用特定的成像通道观察载玻片。

细胞核染色可显示宿主和细菌的DNA。

组织中所有细菌均表达红色荧光，而绿色荧光的表达则指示宿主与病原体相互作用的位点。

在适当的实验终点，将肾脏、心脏、肝脏、肺和脾脏取出，放入含有10%缓冲福尔马林的15毫升聚丙烯管中，在室温下避光孵育24至48小时，同时轻轻振荡或旋转。

固定结束后，将器官包埋于透明组织冷冻介质中，于零下80摄氏度保存。使用冷冻切片机切取10 µm厚的组织切片，并将切片置于预先清洁并带电荷的载玻片上，在避光条件下干燥20分钟，随后加入含DAPI的硬封片剂。然后加盖盖玻片，室温下避光固化过夜，再将样本转移至4摄氏度长期保存。

为了识别样本中的病灶，将切片置于激光扫描共聚焦显微镜的载物台上，选用合适的物镜观察单个细胞，并获取病灶的图像。