对小鼠心脏组织切片中充满细菌的微小病灶进行免疫染色以用于成像

从一张含有经化学固定的感染了肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae）的小鼠心脏组织切片的载玻片开始，该细菌为一种致病菌。

这种感染会导致心肌内形成充满细菌的细胞外微小病灶。

用缓冲液冲洗切片，以去除任何残留的固定剂。

使用非离子型去污剂处理以通透宿主细胞膜。

再次清洗以去除任何残留的洗涤剂。

用封闭剂孵育切片，以封闭非特异性结合位点。

冲洗以去除未结合的封闭剂。

加入一种与细菌荚膜多糖结合的特异性一抗。

洗涤以去除未结合的抗体，然后加入绿色荧光染料标记的二抗，使其与一抗结合。

使用核染料进行复染，以标记宿主细胞核。

用封片剂封片并洗涤切片。

使用共聚焦显微镜观察切片，以可视化微病变内标记的细菌。

使用带正电荷的玻璃载玻片上的5微米心脏切片，首先将切片冷冻，然后解冻并使其自然风干。在25摄氏度下，用10%中性缓冲福尔马林固定载玻片10分钟。随后，用PBS洗涤三次，每次五分钟，以去除固定液。

随后用含0.2% Triton X-100的PBS溶液对组织进行15分钟的透化处理。用PBS溶液再清洗三次，去除去污剂。然后用含10%山羊血清的PBS溶液封闭组织1小时。用PBS冲洗后，在切片上加入抗血清，37摄氏度孵育2小时。阴性对照组使用正常兔抗血清处理。

由于心肌组织容易吸收XI免疫荧光染料，导致背景信号较高，因此可能需要优化不同类型抗体的孵育浓度和孵育时间。

2小时后，用PBS洗去抗血清。然后加入二抗溶液，37摄氏度孵育30分钟。接着，加入终浓度为5毫克/毫升的DAPI染色剂，并用PBS洗涤载玻片。最后，用FluorSave封片剂封片，并使用共聚焦显微镜进行成像。