一种基于快速成像的表面诱导细菌毒力筛选检测方法

从含有表面附着细菌以及浮游或自由漂浮细菌的培养皿开始。

将阿米巴细胞加入两个样品中。

在每个样本上放置含有Calcein-AM（一种可渗透细胞的染料）的琼脂糖垫。

去除多余液体，晾干后孵育平板。

在表面附着细菌的培养皿中，表面接触会促进毒力基因上调，从而表达毒素。

这些毒素会破坏阿米巴膜并改变其形态。

受损的变形虫膜允许更多的钙黄绿素-AM进入细胞质，细胞内酯酶将其切割为荧光性的钙黄绿素，从而导致其积累。

相比之下，浮游细菌由于缺乏表面接触，保持非致病性，使阿米巴细胞膜保持完整。这减少了Calcein-AM进入阿米巴细胞，限制了荧光钙黄素的积累。

健康的阿米巴也会吞噬非致病性细菌。

在荧光显微镜下，明亮且呈圆形的阿米巴细胞表明存在致病性细菌相互作用，而暗淡且形态不规则的阿米巴细胞则表明为非致病性细菌相互作用。

为了检测表面附着细菌细胞的毒力，从先前获得的表面附着细菌细胞中加入10微升的阿米巴细胞。

为了分离浮游细胞，将10 µL培养物转移至新的培养皿中。

接下来，通过将10微升的阿米巴细胞与先前获得的浮游细菌混合，检测浮游细胞的毒力。

立即将小块琼脂垫放置在培养皿表面相应的细菌-变形虫混合物上方。

然后，用移液器轻轻吸去多余的液体，并将培养皿静置干燥20分钟。

将培养皿盖上盖子，在室温下继续孵育 40 分钟。最后，使用荧光显微镜至少采集 100 个变形虫细胞的图像。