评估感染研究中小鼠脾脏的细菌负荷

从一只已感染致病菌的小鼠脾脏开始。

将脾脏置于冰冷的磷酸盐缓冲液中，以维持细菌的活性。

使用匀浆器匀浆脾脏，以机械方式破坏组织，使胞内细菌释放到缓冲液中。

这会产生反映脾脏内总细菌负荷的细菌悬液。

对匀浆液进行连续稀释，以降低溶液中的细菌密度，从而准确测定细菌数量。

接下来，取一个分为两个区域的营养琼脂平板。

将相同的细菌稀释液接种到琼脂平板的每个区域，以生成重复样本。

让培养皿晾干，然后倒置并进行培养。在培养过程中，有活力的细菌会增殖并形成明显的菌落。

计数平板各区域的菌落数，以计算平均菌落形成单位（CFU），该数值代表感染期间脾脏中的总细菌负荷。

将脾脏置于含有2毫升PBS的15毫升离心管中。随后，每个样本使用单独的一次性匀浆器在冰上研磨组织，接着对组织匀浆液进行连续梯度稀释。

将稀释液分别接种于单个 TSA 平板的两侧，每个稀释度设两个重复，接种后让样品短暂干燥。然后将平板倒置，在 37°C 静置培养箱中过夜培养，次日早晨计数平板两侧及每个稀释度的细菌菌落数并取平均值。