评估抑制剂对菌膜形成的影响 枯草芽孢杆菌

从一株在营养丰富的培养基中培养的土壤细菌Bacillus subtilis开始。

离心以沉淀细菌，弃去上清液，然后将沉淀重悬于支持生物膜形成的化学成分明确的培养基中。

测定培养物的光密度以确定合适的细菌浓度。

将培养物加入到对照组的含有限定培养基的孔中，以及实验组的含有抑制剂的限定培养基的孔中。

在静态条件下培养。细菌向上迁移并在气液界面处聚集，此处较高的氧气供应有利于细菌生长。

在对照孔中，位于界面处的细菌会分泌胞外基质成分，形成一种称为菌膜的浮膜结构，这是一种可增强细菌存活率的保护性结构。

在测试孔中，抑制剂破坏了基质的合成，导致细菌群体分散。

该实验表明，抑制剂可阻断生物膜的形成，而生物膜形成是细菌致病的关键特征。

首先，挑选一个合适的单菌落，转移至3毫升LB液体培养基中。将该初始培养物置于37摄氏度的摇床培养箱中培养4小时。培养结束后，取1.5毫升初始培养物，离心4分钟。

小心移除上清液，然后将沉淀重悬于 1.5 毫升 MSgg 培养基中。为培养菌膜，准备一个 12 孔细胞培养板，每孔加入 3 毫升 MSgg 培养基。向其中部分孔中加入含有小分子抑制剂的 MSgg 培养基，设置不同浓度梯度，并将不同浓度的处理组在培养板上分散放置，以避免边缘效应。

测量重悬的起始培养物在600纳米处的光密度。培养物的光密度值应在0.6至1之间。这对系统的稳健性至关重要。

向培养板的每个孔中接种3 µL重悬的起始培养物。随后，在23 °C下静置培养三天。之后，从培养箱中取出培养板，观察菌膜形成情况。