一种用于体外细菌生物膜形成的带腔室盖玻片方法

取一培养物，其中含有在营养丰富的培养基中培养的生物膜形成细菌。

用新鲜培养基稀释菌液，并在振荡条件下培养以促进细菌生长，直至达到所需浓度。

接下来，将培养物加入含有囊性纤维化患者来源的痰液滤液的新鲜培养基中。

这些滤液含有宿主来源的因子，可促使细菌进行生物膜形成。

将制备好的悬液加入多孔玻璃培养皿的孔中，静置孵育，使细菌附着于玻璃表面。

孵育后，移除培养基，并用新鲜培养基轻轻冲洗各孔，以去除未黏附的细菌。

将含有痰滤液的新鲜培养基加入孔板中，并再次静置培养反应板。

孵育期间，培养基中的宿主来源因子会激活细菌的信号通路，从而触发胞外基质的产生并促进结构化生物膜的形成。

生物膜现已准备好进行进一步分析。

将40微升预先制备的菌液加入4毫升新鲜的LB培养基（Luria肉汤）中，培养细菌至其在600纳米处的光密度达到0.55。

接下来，将100微升0.5 OD的菌液加入到400微升已制备的10%痰液滤液LB培养基中进行稀释。取200微升稀释后的菌液接种到载玻片腔室的孔中。

在37摄氏度下静置培养四小时，使细菌附着。

孵育4小时后，移除培养基，并用200微升1倍新鲜LB培养基轻轻冲洗生物膜。将剩余培养基更换为200微升新鲜LB培养基，在37°C条件下静置培养生物膜。每12小时更换一次培养基，无需冲洗，直至生物膜可用于显微镜观察。