制备小鼠口咽部吸入模型以建立细菌性肺部感染

从一只已固定并麻醉的小鼠开始。轻轻拉出其舌头以暴露口咽部，即位于口腔后方的咽喉区域。

将少量细菌悬液注入咽部。

液体残留在口咽部并引发呼吸反射。

这种反射会导致口咽部误吸，将细菌带入气管并进入肺部。

细菌到达小气道和肺泡，在此处繁殖并附着于肺组织的上皮内衬。

这会激活常驻巨噬细胞，并促使释放招募中性粒细胞的信号分子。这些中性粒细胞释放细胞因子，引发炎症反应。

将小鼠放回笼中并进行监测。

小鼠安乐死后，剪断气管及附近血管以取出肺组织。

将肺组织包埋于组织冷冻介质中，并进行冷冻，以备后续对细菌感染的肺组织进行分析。

接种小鼠时，将第一只麻醉后的动物用一根结实的细绳挂在其上门齿上，固定在操作台面上方的固定物体上，悬挂高度约为小鼠体长的两倍。使用无菌钝头镊子轻轻拉出舌头，并用无菌戴手套的手指固定舌头，以暴露口咽部。将微量移液器的推杆按至第一停点，将50 µL接种物注入口咽部，直至小鼠通过反射性吸入将细菌悬液吸入体内。

当将接种物放入小鼠的口咽部时，小鼠会停止呼吸数秒钟，最终通过反射性吸入使细菌悬液进入肺部，此时可听到液体进入肺部所发出的特异性爆裂音。

然后将动物放回笼中，并进行监测，直至完全卧倒。在适当的实验终点，剪断气管、肺动脉和肺静脉，以便取出肺组织。

为了进行疾病进展的组织病理学分析，将肺组织放入标本模具中，并加入适量的最佳切割温度包埋剂，直至完全浸没组织。然后将样品在负80摄氏度下冷冻，直至进行切片和分析。