0 次观看 • 3:15 分钟 • March 31st, 2026
从一块大载玻片开始，在其两侧边缘各放置一片小载玻片，形成双层结构。
将熔化的琼脂糖倒入空间中，并用另一块大号玻璃载片覆盖。
冷却装置以凝固琼脂糖。
取出玻璃片，并将琼脂糖切成小块。
将琼脂糖垫放置在固定于载玻片上的粘性框架内。
取一培养物，其中含有经基因改造的致病菌，该致病菌表达一种带有荧光标记的分泌系统，该系统对宿主感染至关重要。
使用致密的细菌菌斑并将其悬浮于水中。
涡旋以均匀分散细菌。
将悬液加到琼脂糖垫上以固定细菌。
用盖玻片封片以保持湿润。
在明场照明下，选择一个细胞区域进行成像。
优化显微镜设置以减少光漂白并提高信号灵敏度。
切换到荧光通道以检测荧光标记的细菌。
首先制备用于活细胞成像的琼脂糖垫。在玻璃烧瓶中配制约 30 毫升 1% 的低熔点琼脂糖水溶液，微波加热约 90 秒，期间偶尔摇动，直至琼脂糖完全溶解。
将两个尺寸为 22 × 22 × 0.15 毫米的玻璃盖片叠放在一个尺寸为 25 × 75 × 1.1 毫米的载玻片的一侧边缘，上下叠放。然后，在另一侧边缘同样叠放另外两个较小的盖片。用移液器吸取约 1 毫升熔化的琼脂糖，注入两个上层玻璃盖片之间的中心载玻片上，再将另一张大载玻片盖在熔化的琼脂糖上，注意避免产生气泡。
将载玻片置于 4 摄氏度下冷却 15 分钟，然后使用解剖刀或剃刀小心地将组织垫切成小方块。在 25 × 75 × 1.1 毫米的玻璃载玻片上固定一个双面粘附框，并将数个组织垫放置于载玻片上。将大量 Legionella pneumophila 溶解于 1 毫升双蒸水中。
然后涡旋混匀，取2至3微升稀释液滴加到样品垫上。轻轻将一块58 × 24 × 0.15毫米的盖玻片置于粘性框架上。使用明场照明选择待成像的细胞。
然后，在显微镜软件的采集窗口中，将ND调整为180，像素合并（binning）设置为2×2。使用488纳米通道对样本曝光500至1000毫秒，并采用相同参数对未标记的Legionella pneumophila进行成像，以验证荧光的特异性。