利用微灌胃法建立斑马鱼幼鱼感染模型

0 次观看2:26 分钟 • March 31st, 2026

将一条麻醉后的斑马鱼幼鱼放入琼脂糖模具的凹槽中,使其头部向上倾斜,以便在注射时接近肠道。

用低熔点琼脂糖覆盖,然后让琼脂糖凝固以固定幼虫。

取一支含有悬浮于示踪染料溶液中的致病菌的显微注射针。

在体视显微镜下,将针头倾斜一定角度,引导针头穿过琼脂糖进入幼虫口部。

将其推进食管进入肠道。

将细菌注入肠腔,并使用示踪染料确认递送效果。这种称为微量灌胃的非侵入性方法,可模拟自然感染途径。

拔出针头。切下琼脂糖并将幼虫转移至新鲜培养基中。

细菌在肠道内复制并释放毒素,损害肠上皮,促进细菌侵入并在深层组织中定植。

斑马鱼感染模型已准备就绪,可供分析。

在含有凹槽的 1.5% 琼脂糖平板上,将一滴 0.8% 低熔点琼脂糖置于斑马鱼幼体上,使其覆盖。

轻轻调整幼鱼,使其头部朝上呈45度角,尾部紧贴沟槽壁。轻柔操作针头穿过琼脂糖,进入斑马鱼幼鱼的口部,并通过食道。当针尖进入前肠膨大部后,按压注射踏板,注入0.5至1纳升的细菌培养液。

填充肠道管腔,避免液体从食管或泄殖腔溢出。轻轻将针头从斑马鱼口中抽出。灌胃后,使用柔软的微量移液吸头从琼脂糖中取出感染的斑马鱼幼鱼:先切割周围琼脂糖,再将幼鱼提起。

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最后更新:29 八月 2026