0 次观看 • 3:03 分钟 • March 31st, 2026
取一种能够感染叶片组织的细菌培养物。
刮取菌落并悬浮于盐溶液中。
通过测量光密度来评估细菌浓度，然后稀释至所需的OD值。
进行连续稀释以达到最终的接种浓度。
添加表面活性剂以降低表面张力，确保细菌在叶片上均匀扩散。
将悬浮液转移至培养皿中。
接下来，将两根木棒横放在一个容器的顶部 拟南芥 锅
将植株倒置在培养皿上方，使叶片浸入悬浮液中。
将装置放入真空室中，并施加真空脉冲
施加的真空通过叶片组织的自然开口去除其中的空气。
释放真空可恢复大气压，从而将细菌压入叶片中。
重复脉冲以实现最大渗透。
移除培养皿，然后吸去多余的接种物。
已感染细菌的Arabidopsis叶片可进行后续分析。
将目标 Pseudomonas syringae 菌株的甘油保存管从负80摄氏度取出，在添加了适当抗生素的LB平板上划线。于28摄氏度培养40至48小时。刮取细菌生物量，并将其重悬于5毫升10毫摩尔的氯化镁溶液中。
在600纳米处测定光密度，并通过添加10毫摩尔氯化镁将其调整至0.1。在10毫摩尔氯化镁中进行系列稀释，以获得每毫升5×10⁵ CFU的最终接种浓度。然后，为拟南芥（Arabidopsis）植物制备200毫升接种液，为菜豆植物制备50毫升接种液。
接种前，将表面活性剂Silwet L-77分别添加至终浓度为0.02%（用于菜豆接种）和0.01%（用于Arabidopsis）。进行Arabidopsis浸润时，在花盆上方交叉放置两根木棍形成“X”形，然后将花盆倒置于直径14厘米、盛有200毫升接种液的培养皿上。对菜豆叶片进行接种时，将植株和接种液放入真空室中，并将叶片插入含有接种液的50毫升锥形离心管内。
用500毫巴的压力脉冲处理30秒，以渗透叶片。用一张纸吸去多余的接种液，然后将植株放回相应的生长室中。