光漂白蓝细菌色素以成像生长调控蛋白

从固定、固定化并透化的附着在盖玻片上的蓝细菌细胞开始。

这些蓝细菌细胞表达低丰度的生长调控蛋白。

在高分辨率荧光成像过程中，蓝细菌细胞内的天然光敏色素会发出背景荧光。

这会降低在可视化这些低丰度蛋白质时的图像质量。

为了尽量减少背景荧光，将含有蓝细菌细胞的盖玻片放入染色皿中。

加入含有血清蛋白的封闭缓冲液，以防止后续步骤中抗体的非特异性结合，同时加入去垢剂以维持细胞通透性。

将染色皿置于冰上，并用强氙灯照射细胞。

高强度光照引发光漂白，降解光敏色素，而低丰度的生长调控蛋白则不受影响。

低温条件可最大限度减少热诱导损伤，并保持细胞完整性。

该过程可通过免疫染色在高分辨率荧光显微镜下清晰地可视化丰度较低的生长调控蛋白。

将洗涤后的盖玻片转移至染色皿中。

在盖玻片上加入 50 微升封闭缓冲液。将整个染色皿置于冰上，然后移至氙灯光源下进行光漂白，至少持续 60 分钟。光漂白和封闭结束后，用纸巾边缘吸除封闭缓冲液。