利用受激拉曼散射显微镜检测细菌抗生素敏感性

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从细菌样本开始,先用逐渐增加浓度的抗生素预处理,以消除易感细菌。

在相应的管子中加入含有氧化氘和相同抗生素浓度的培养基。

在摇晃条件下孵育管子。

氘氧化物进入细菌细胞,氘被掺入新合成的生物分子中,形成碳-氘键。

把细菌甩掉,丢弃上清液,然后清洗。

添加固定剂以保护细菌结构。

加入水,离心机,去除上清液。

将细菌重新悬浮,并将悬浮液转移到涂有聚L-赖氨酸涂层的盖玻璃上,然后密封。

将样品放置在预校准的受激拉曼散射显微镜(SRS)显微镜的舞台上。加水,降低物镜。

获取多个场的图像以评估碳-氘振动频率。

在较高的抗生素浓度下,碳氘信号减弱,表明细菌存活能力降低。

通过将SRS信号强度与细菌存活率关联,能够快速评估抗生素的敏感性。

孵育1小时后,将700微升用含100%氘MHB培养基连续稀释的抗生素加入300微升抗生素预处理细菌中,浓度相同。通过多次移液法上下均质混合物。将700微升无抗生素、100%含氘的MHB培养基加到300微升无抗生素细菌,作为阳性对照。

将700微升无抗生素0%氘含MHB培养基加入300微升无抗生素细菌作为负对照。将所有微管以37摄氏度、每分钟200转的温度孵育30分钟。孵育后,将1毫升抗生素和氘处理的细菌样本离心,以6200 倍克 、4摄氏度离心5分钟。然后用净水洗涤颗粒两遍。将样品固定在10%体积的福马林溶液中,并以4摄氏度储存。

样品制备时,用纯水清洗1毫升固定细菌溶液,并在4摄氏度下以6200倍 离心机离心5分钟。

去除上清液,用消毒水将细菌溶液浓缩至约20微升。将细菌溶液沉积在涂有聚L-赖氨酸涂层的盖玻璃上,夹入另一块盖玻璃,封口样品。将细菌样本放在60倍水浸目标下的样品台。开始对细菌样本进行SRS成像。每个样本至少拍摄三个视野。

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Last updated: 11 July 2026