0 次观看 • 3:46 分钟 • March 31st, 2026
从经过浓度递增的抗生素预处理的细菌样本开始,该抗生素可消除敏感性细菌。
向相应的试管中加入含有重水和相同抗生素浓度的培养基。
在振荡条件下孵育试管。
重水进入细菌细胞后,其中的氘会被整合到新合成的生物分子中,形成碳-氘键。
离心细菌,弃去上清液,并清洗。
加入固定剂以保存细菌结构。
加入水,离心,并移除上清液。
重悬细菌,并将菌液转移至多聚-L-赖氨酸包被的盖玻片上,然后密封。
将样品置于已预校准的受激拉曼散射(SRS)显微镜载物台上。加入水并降低物镜。
获取多个视野的图像以评估碳-氘振动频率。
在较高抗生素浓度下,碳-氘信号减弱,表明细菌活力下降。
这使得通过将SRS信号强度与细菌活力相关联,快速评估抗生素敏感性成为可能。
孵育1小时后,将700微升用含100%氘的MHB培养基进行系列稀释的抗生素加入到300微升经相同浓度抗生素预处理的细菌中。通过反复吹打数次使混合物混匀。作为阳性对照,将700微升不含抗生素的含100%氘的MHB培养基加入到300微升不含抗生素的细菌中。
加入700微升不含抗生素、含0%氘的MHB培养基至300微升不含抗生素的细菌中,作为阴性对照。将所有微量离心管在37摄氏度、每分钟200转的条件下孵育30分钟。孵育结束后,将1毫升经抗生素和氘处理的细菌样品在6,200 × g条件下离心 g 在4摄氏度下离心5分钟。随后用纯化水洗涤沉淀物两次。用体积分数为10%的甲醛溶液固定样品,并于4摄氏度保存。
样品制备时,用1毫升纯化水洗涤固定后的细菌溶液,并将洗涤后的细菌溶液在6,200 × g条件下离心 g 在4摄氏度下持续5分钟。
吸去上清液,用无菌水将细菌溶液浓缩至约20微升。将细菌溶液滴加到聚-L-赖氨酸包被的盖玻片上,再用另一张盖玻片夹紧,并密封样品。将细菌样品置于显微镜载物台上,使用60倍水浸物镜进行观察。开始对细菌样品进行受激拉曼散射(SRS)成像。每个样品至少成像三个视野。
本方案展示了利用受激拉曼散射显微技术评估细菌对抗生素敏感性的方法。通过测量碳–氘振动频率,研究人员能够快速评估细菌在抗生素处理后的存活状态。
快速检测细菌对抗生素的敏感性对于抗感染药物的早期发现和转化研究至关重要。受激拉曼散射(SRS)显微技术通过测量氘标记的代谢活性,实现对细菌活力的定量、单细胞水平评估,从而提高抗菌筛选结果的预测可靠性。该方法可加速抗感染药物研发过程中关键节点的决策。
这种基于SRS的方法可整合到抗感染药物发现的整个流程中,从早期靶点验证到先导化合物筛选及临床前评估。
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最后更新:22 八月 2026